Rui Huang, Bo Xu
Qendra e Kërkimit dhe Zhvillimit të Aplikimit
Prezantimi
Një peptid është një përbërës i përbërë nga aminoacide, secila prej të cilave ka veti fizike dhe kimike unike për shkak të llojeve dhe rendit të ndryshëm të mbetjeve të aminoacideve që përbëjnë sekuencën e tij.Me zhvillimin e sintezës kimike të fazës së ngurtë, sinteza kimike e peptideve të ndryshme aktive ka bërë përparim të madh.Megjithatë, për shkak të përbërjes së ndërlikuar të peptidit të marrë nga sinteza e fazës së ngurtë, produkti përfundimtar duhet të pastrohet me metoda të besueshme të ndarjes.Metodat e pastrimit të përdorura zakonisht për peptidet përfshijnë kromatografinë e shkëmbimit të joneve (IEC) dhe kromatografinë e lëngshme me performancë të lartë të fazës së kundërt (RP-HPLC), të cilat kanë disavantazhet e kapacitetit të ulët të ngarkimit të mostrës, kostos së lartë të mediave ndarëse, pajisjeve të komplikuara dhe të kushtueshme të ndarjes. etj. Për pastrimin e shpejtë të peptideve me molekula të vogla (MW < 1 kDa), një rast aplikimi i suksesshëm u publikua më parë nga Santai Technologies, në të cilin një fishek SepaFlash RP C18 u përdor për pastrimin e shpejtë të timopentinës (TP-5) dhe është marrë produkti i synuar që plotëson kërkesat.
Figura 1. 20 aminoacide të zakonshme (riprodhuar nga www.bachem.com).
Ekzistojnë 20 lloje të aminoacideve që janë të zakonshme në përbërjen e peptideve.Këto aminoacide mund të ndahen në grupet e mëposhtme sipas polaritetit të tyre dhe vetive acido-bazike: jopolare (hidrofobike), polare (të pangarkuara), acidike ose bazike (siç tregohet në figurën 1).Në një sekuencë peptide, nëse aminoacidet që përbëjnë sekuencën janë kryesisht polare (siç janë shënuar me ngjyrë rozë në figurën 1), si cisteina, glutamina, asparagina, serina, treonina, tirozina, etj., atëherë ky peptid mund të ketë një polaritet dhe të jetë shumë i tretshëm në ujë.Gjatë procedurës së pastrimit për këto mostra të forta peptide polare me anë të kromatografisë me fazë të kundërt, do të ndodhë një fenomen i quajtur kolaps i fazës hidrofobike (referojuni një shënimi aplikimi të publikuar më parë nga Santai Technologies: Kolapsi i fazës hidrofobike, kolonat e kromatografisë me fazë të kundërt AQ dhe aplikimet e tyre).Krahasuar me kolonat e rregullta C18, kolonat e përmirësuara C18AQ janë më të përshtatshmet për pastrimin e mostrave të forta polare ose hidrofile.Në këtë postim, një peptid i fortë polar u përdor si mostër dhe u pastrua nga një kolonë C18AQ.Si rezultat, produkti i synuar që plotëson kërkesat është marrë dhe mund të përdoret në kërkimin dhe zhvillimin e mëposhtëm.
| Instrumenti | SepaBean™makinë 2 | |||
| fishekë | 12 g fishek flash SepaFlash C18 RP (silicë sferike, 20 - 45 μm, 100 Å, numri i porosisë: SW-5222-012-SP) | 12 g fishek flash SepaFlash C18AQ RP (silicë sferike, 20 - 45 μm, 100 Å, numri i porosisë:SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Gjatësia e valës | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Faza e lëvizshme | Tretësi A: Uji Tretësi B: Acetonitril | |||
| Shkalla e rrjedhjes | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Ngarkimi i mostrës | 30 mg | |||
| Gradient | Koha (CV) | Tretësi B (%) | Koha (min) | Tretësi B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Rezultate dhe diskutime
Për të krahasuar performancën e pastrimit për kampionin e peptidit polar midis kolonës së rregullt C18 dhe kolonës C18AQ, ne përdorëm një kolonë të rregullt C18 për pastrimin flash të mostrës si fillim.Siç tregohet në figurën 2, për shkak të kolapsit të fazës hidrofobike të zinxhirëve C18 të shkaktuar nga raporti i lartë ujor, kampioni mezi u mbajt në fishekun e rregullt C18 dhe u elua drejtpërdrejt nga faza e lëvizshme.Si rezultat, kampioni nuk u nda dhe nuk u pastrua në mënyrë efektive.
Figura 2. Kromatogrami flash i kampionit në një fishek të rregullt C18.
Më pas, ne përdorëm një kolonë C18AQ për pastrimin flash të mostrës.Siç tregohet në figurën 3, peptidi u mbajt në mënyrë efektive në kolonë dhe më pas u elua.Produkti i synuar u nda nga papastërtitë në kampionin e papërpunuar dhe u mblodh.Pas liofilizimit dhe më pas analizuar me HPLC, produkti i pastruar ka një pastërti prej 98.2% dhe mund të përdoret më tej për kërkimin dhe zhvillimin e hapit të ardhshëm.
Figura 3. Kromatogrami flash i kampionit në një fishek C18AQ.
Si përfundim, fishek flash SepaFlash C18AQ RP i kombinuar me sistemin e kromatografisë flash SepaBean™makina mund të ofrojë një zgjidhje të shpejtë dhe efektive për pastrimin e mostrave të forta polare ose hidrofile.
Ekzistojnë një seri fishekësh flash SepaFlash C18AQ RP me specifika të ndryshme nga teknologjia Santai (siç tregohet në Tabelën 2).
| Numri i artikullit | Madhësia e kolonës | Shkalla e rrjedhjes (mL/min) | Maksimumi.Presioni (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabela 2. Fishekët flash SepaFlash C18AQ RP.Materialet e paketimit: silicë sferike C18(AQ)-lidhur me efikasitet të lartë, 20 - 45 μm, 100 Å.
Për informacion të mëtejshëm mbi specifikimet e detajuara të makinës SepaBean™ ose informacionin e porositjes për fishekët e flashit të serisë SepaFlash, ju lutemi vizitoni faqen tonë të internetit.
Koha e postimit: Tetor-12-2018