A aplicação de colunas C18AQ na purificação de peptídeos polares fortes

Rui Huang, Bo Xu
Centro de P&D de aplicações

Introdução
Um peptídeo é um composto composto por aminoácidos, cada um dos quais possui propriedades físicas e químicas únicas devido aos diferentes tipos e ordem de resíduos de aminoácidos que constituem sua sequência.Com o desenvolvimento da síntese química em fase sólida, a síntese química de vários peptídeos ativos fez grandes progressos.Contudo, devido à composição complicada do péptido obtido por síntese em fase sólida, o produto final deve ser purificado por métodos de separação fiáveis.Os métodos de purificação comumente usados ​​para peptídeos incluem cromatografia de troca iônica (IEC) e cromatografia líquida de alto desempenho de fase reversa (RP-HPLC), que têm as desvantagens de baixa capacidade de carregamento de amostra, alto custo de meios de separação, equipamento de separação complicado e caro, etc. Para a purificação rápida de peptídeos de moléculas pequenas (MW <1 kDa), um caso de aplicação bem-sucedido foi publicado anteriormente pela Santai Technologies, no qual um cartucho SepaFlash RP C18 foi utilizado para a purificação rápida de timopentina (TP-5) e o produto alvo atendendo aos requisitos foi obtido.

Figura 1. 20 aminoácidos comuns (reproduzido em www.bachem.com).

Existem 20 tipos de aminoácidos comuns na composição dos peptídeos.Esses aminoácidos podem ser divididos nos seguintes grupos de acordo com sua polaridade e propriedade ácido-base: apolares (hidrofóbicos), polares (sem carga), ácidos ou básicos (conforme mostrado na Figura 1).Em uma sequência peptídica, se os aminoácidos que constituem a sequência forem principalmente polares (conforme marcado em rosa na Figura 1), como Cisteína, Glutamina, Asparagina, Serina, Treonina, Tirosina, etc., então este peptídeo pode ter um forte polaridade e ser altamente solúvel em água.Durante o procedimento de purificação para essas amostras de peptídeos polares fortes por cromatografia de fase reversa, ocorrerá um fenômeno chamado colapso de fase hidrofóbica (consulte uma nota de aplicação publicada anteriormente pela Santai Technologies: Colapso de fase hidrofóbica, colunas de cromatografia de fase reversa AQ e suas aplicações).Em comparação com as colunas C18 regulares, as colunas C18AQ melhoradas são mais adequadas para a purificação de amostras polares ou hidrofílicas fortes.Neste post, um peptídeo polar forte foi utilizado como amostra e purificado por uma coluna C18AQ.Como resultado, o produto alvo que atende aos requisitos foi obtido e poderá ser utilizado na pesquisa e desenvolvimento seguintes.