Rui Huang, Bo Xu
Applikatioun R&D Center
Aféierung
E Peptid ass eng Verbindung aus Aminosäuren, déi all eenzegaarteg physesch a chemesch Eegeschaften hunn wéinst de verschiddenen Aarten an Uerdnung vun Aminosaierreschter, déi seng Sequenz ausmaachen.Mat der Entwécklung vu fester Phase chemescher Synthese huet d'chemesch Synthese vu verschiddenen aktive Peptiden e grousse Fortschrëtt gemaach.Wéi och ëmmer, wéinst der komplizéierter Zesummesetzung vum Peptid, deen duerch zolidd Phase Synthese kritt gëtt, sollt d'Endprodukt duerch zouverlässeg Trennungsmethoden gereinegt ginn.Déi allgemeng benotzt Reinigungsmethoden fir Peptiden enthalen Ionenaustauschchromatographie (IEC) a Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC), déi d'Nodeeler vun enger gerénger Probebelaaschtungskapazitéit hunn, héich Käschte fir Trennungsmedien, komplizéiert an deier Trennungsausrüstung, etc.. Fir d'rapid Reinigung vu klenge Molekül-Peptiden (MW <1 kDa), gouf virdru vun Santai Technologies en erfollegräiche Applikatiounsfall publizéiert, an deem eng SepaFlash RP C18 Cartouche fir d'rapid Reinigung vun Thymopentin (TP-5) benotzt gouf an de Zilprodukt entsprécht den Ufuerderunge gouf kritt.
Figur 1. 20 gemeinsam Aminosaier Saieren (vun www.bachem.com reproduzéiert).
Et gi 20 Aarte vun Aminosäuren déi allgemeng an der Zesummesetzung vu Peptiden sinn.Dës Aminosäuren kënnen an de folgende Gruppen opgedeelt ginn no hirer Polaritéit a Säurebasiseigenschaften: net-polar (hydrophobesch), polar (ongelueden), sauer oder Basis (wéi an der Figur 1).An enger Peptid Sequenz, wann d'Aminosäuren, déi d'Sequenz bilden, meeschtens polar sinn (wéi a rosa Faarf an der Figur 1 markéiert sinn), wéi Cystein, Glutamin, Asparagin, Serin, Threonin, Tyrosin, etc., da kéint dëst Peptid e staarkt hunn Polaritéit a si héich löslech am Waasser.Wärend der Reinigungsprozedur fir dës staark polare Peptid Echantillon duerch ëmgedréint-Phase Chromatographie, wäert e Phänomen genannt hydrophobe Phase Zesummebroch geschéien (kuckt op eng virdrun publizéiert Applikatioun Notiz vun Santai Technologies: Hydrophobic Phase Zesummebroch, AQ Reversed Phase Chromatography Columns an hir Uwendungen).Am Verglach mat de reguläre C18 Sailen sinn déi verbessert C18AQ Sailen am meeschte gëeegent fir d'Reinigung vu staarke polare oder hydrophile Proben.An dësem Post gouf e staarkt polare Peptid als Probe benotzt a gereinegt vun enger C18AQ Kolonn.Als Resultat gouf d'Zilprodukt entsprécht den Ufuerderunge kritt a konnt an der folgender Fuerschung an Entwécklung benotzt ginn.
| Instrument | SepaBean™Maschinn 2 | |||
| Patrounen | 12 g SepaFlash C18 RP Flash Cartouche (kugelgestalt Silica, 20 - 45 μm, 100 Å, Bestellnummer: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP Flash Cartouche (kugelgestalt Silica, 20 - 45 μm, 100 Å, Bestellnummer: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Wellelängt | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobile Phase | Léisungsmëttel A: Waasser Léisungsmëttel B: Acetonitril | |||
| Duerchflossrate | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Prouf Luede | 30 mg | |||
| Gradient | Zeit (CV) | Léisungsmëttel B (%) | Zeit (min) | Léisungsmëttel B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29,0 | 87 | |||
Resultater an Diskussioun
Fir d'Reinigungsleistung fir d'polare Peptidprobe tëscht der regulärer C18 Kolonn an der C18AQ Kolonn ze vergläichen, hu mir eng regulär C18 Kolonn fir d'Flashreinung vun der Probe als Start benotzt.Wéi an der Figur 2 gewisen, wéinst dem hydrophobesche Phase Zesummebroch vun den C18 Ketten verursaacht duerch héije Waasserverhältnis, gouf d'Probe kaum op der regulärer C18 Cartouche behalen a gouf direkt vun der mobiler Phase eluéiert.Als Resultat gouf d'Probe net effektiv getrennt a gereinegt.
Figur 2. D'Flash chromatogram vun der Prouf op enger regulärer C18 Cartouche.
Als nächst hu mir eng C18AQ Kolonn benotzt fir d'Blitzreinigung vun der Probe.Wéi an der Figur 3 gewisen, gouf d'Peptid effektiv op der Kolonn behalen an duerno erausgezunn.D'Zilprodukt gouf vun den Gëftstoffer an der Matière Prouf getrennt a gesammelt.No lyophilization an dann vun HPLC analyséiert, huet de gereinegt Produit eng Rengheet vun 98,2% a kéint weider fir nächst Schrëtt Fuerschung an Entwécklung benotzt ginn.
Figur 3. D'Flash chromatogram vun der Prouf op engem C18AQ Cartouche.
Als Conclusioun, SepaFlash C18AQ RP Flash Cartouche kombinéiert mat der Flash Chromatographie System SepaBean™Maschinn kéint eng séier an effektiv Léisung fir d'Rengung vu staarke polare oder hydrophile Proben ubidden.
Et ginn eng Serie vun de SepaFlash C18AQ RP Flash Patrounen mat verschiddene Spezifikatioune vun Santai Technology (wéi an Table 2 gewisen).
| Artikelnummer | Kolonn Gréisst | Duerchflossrate (ml/min) | Max.Drock (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5 ,4g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) Präis | 33g vun | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) Präis | 48g vun | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) Präis | 105 g | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420g vun | 40-80 | 250/17.2 |
Dësch 2. SepaFlash C18AQ RP Flash Patrounen.Verpackungsmaterial: Héicheffizient kugelfërmeg C18(AQ) gebonnen Silika, 20 - 45 μm, 100 Å.
Fir weider Informatioun iwwer detailléiert Spezifikatioune vun der SepaBean ™ Maschinn, oder d'Bestellungsinformatioun iwwer SepaFlash Serie Flash Patrounen, besicht w.e.g. eis Websäit.
Post Zäit: Okt-12-2018