የዜና ባነር

ዜና

የ C18AQ አምዶች በጠንካራ የዋልታ Peptides ንፅህና ውስጥ መተግበር

የC18AQ አምዶች በጠንካራ ዋልታ Peptides ማጥራት ላይ መተግበር

Rui Huang, ቦ Xu
የመተግበሪያ R&D ማዕከል

መግቢያ
ፔፕታይድ በአሚኖ አሲዶች የተዋቀረ ውህድ ነው፣ እያንዳንዱም የራሱ የሆነ የአሚኖ አሲድ ቅሪቶች ዓይነቶች እና ቅደም ተከተሎች በመሆናቸው ልዩ አካላዊ እና ኬሚካላዊ ባህሪያት አሏቸው።ጠንካራ-ደረጃ ኬሚካላዊ ውህደት ልማት ጋር, የተለያዩ ንቁ peptides ኬሚካላዊ ውህደት ትልቅ እድገት አድርጓል.ነገር ግን በጠንካራ ደረጃ ውህደት የተገኘው የፔፕታይድ ውስብስብ ስብስብ ምክንያት የመጨረሻው ምርት በአስተማማኝ የመለያ ዘዴዎች መጽዳት አለበት.ለ peptides በተለምዶ ጥቅም ላይ የሚውሉት የመንጻት ዘዴዎች ion exchange chromatography (IEC) እና የተገላቢጦሽ ከፍተኛ አፈፃፀም ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (RP-HPLC) ዝቅተኛ ናሙና የመጫን አቅም ጉዳታቸው፣ የመለያየት ሚዲያ ከፍተኛ ወጪ፣ ውስብስብ እና ውድ መለያየት መሳሪያዎች፣ ወዘተ አነስተኛ ሞለኪውል peptides (MW < 1 kDa) ፈጣን ንፅህና ለማድረግ ፣ የተሳካ የትግበራ ጉዳይ ቀደም ሲል በሳንታይ ቴክኖሎጂዎች ታትሟል ፣ በዚህ ውስጥ SepaFlash RP C18 ካርቶን ቲሞፔንቲን (TP-5) በፍጥነት ለማፅዳት ጥቅም ላይ ውሏል ። የተፈለገውን ምርት ያሟላል.

ምስል 1. 20 የተለመዱ አሚኖ አሲዶች (ከ www.bachem.com የተሻሻለ).

በ peptides ስብጥር ውስጥ የተለመዱ 20 ዓይነት አሚኖ አሲዶች አሉ።እነዚህ አሚኖ አሲዶች በፖላሪቲ እና በአሲድ-መሰረታዊ ንብረታቸው በሚከተሉት ቡድኖች ሊከፋፈሉ ይችላሉ፡- ዋልታ ያልሆነ (ሃይድሮፎቢክ)፣ ዋልታ (ያልተሞላ)፣ አሲድ ወይም መሰረታዊ (በስእል 1 እንደሚታየው)።በፔፕታይድ ቅደም ተከተል ፣ ቅደም ተከተሎችን የሚያካትቱት አሚኖ አሲዶች በአብዛኛው ዋልታዎች ከሆኑ (በሥዕሉ 1 ላይ በሮዝ ቀለም እንደተገለፀው) እንደ ሳይስቴይን ፣ ግሉታሚን ፣ አስፓራጂን ፣ ሴሪን ፣ ታይሮኒን ፣ ታይሮሲን ፣ ወዘተ. ከዚያ ይህ peptide ጠንካራ ሊኖረው ይችላል። polarity እና በውሃ ውስጥ በጣም የሚሟሟ መሆን.ለእነዚህ ጠንካራ የፖላር ፔፕታይድ ናሙናዎች በተገላቢጦሽ-ደረጃ ክሮማቶግራፊ የማጥራት ሂደት በሚካሄድበት ጊዜ ሃይድሮፎቢክ ደረጃ ውድቀት የሚባል ክስተት ይከሰታል (ቀደም ሲል በሳንታይ ቴክኖሎጂ የታተመውን የመተግበሪያ ማስታወሻ ይመልከቱ፡ Hydrophobic Phase Collapse፣ AQ Reversed Phase Chromatography አምዶች እና አፕሊኬሽኖቻቸው)።ከመደበኛው C18 አምዶች ጋር ሲነፃፀር የተሻሻሉ የ C18AQ አምዶች ለጠንካራ ዋልታ ወይም ሃይድሮፊል ናሙናዎች ለማጣራት በጣም ተስማሚ ናቸው.በዚህ ልጥፍ ላይ፣ ጠንካራ የዋልታ peptide እንደ ናሙና ጥቅም ላይ ውሏል እና በC18AQ አምድ ተጠርቷል።በውጤቱም, የታለመው ምርት መስፈርቶቹን የሚያሟላ እና በሚከተሉት ምርምር እና ልማት ውስጥ ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል.

የሙከራ ክፍል
በሙከራው ውስጥ ጥቅም ላይ የዋለው ናሙና በደንበኛ ላብራቶሪ በደግነት የቀረበ ሰው ሠራሽ peptide ነው.peptide በMW ውስጥ 1 ኪሎ ዳ ያህል ነበር እና በተከታታይ በርካታ የዋልታ አሚኖ አሲድ ቅሪቶች ምክንያት ጠንካራ ዋልታ አለው።የጥሬው ናሙና ንፅህና 80% ገደማ ነው.የናሙናውን መፍትሄ ለማዘጋጀት 60 ሚሊ ግራም ነጭ የዱቄት ድፍድፍ ናሙና በ 5 ሚሊ ሊትር ንጹህ ውሃ ውስጥ ይቀልጣል እና ከዚያም ሙሉ በሙሉ ግልጽ መፍትሄ እንዲሆን ለማድረግ አልትራሳውንድ ተዘጋጅቷል.የናሙና መፍትሄው ወደ ፍላሽ አምድ በመርፌ ተወጋ።የፍላሽ ማጽጃው የሙከራ ቅንብር በሰንጠረዥ 1 ውስጥ ተዘርዝሯል።

መሳሪያ

ሴፓቢንማሽን 2

ካርትሬጅዎች

12 ግ SepaFlash C18 RP ፍላሽ ካርቶን (ሉላዊ ሲሊካ፣ 20 - 45 μm፣ 100 Å፣ ትዕዛዝ ቁጥር: SW-5222-012-SP)

12 ግ SepaFlash C18AQ RP ፍላሽ ካርቶን (ሉላዊ ሲሊካ፣ 20 - 45 μm፣ 100 Å፣ የትዕዛዝ ቁጥር:SW-5222-012-SP(AQ))

የሞገድ ርዝመት

254 nm, 220 nm

214 nm

የሞባይል ደረጃ

ሟሟ A፡ ውሃ

የሚሟሟ ለ: አሴቶኒትሪል

የአፈላለስ ሁኔታ

15 ml / ደቂቃ

20 ሚሊ ሊትር / ደቂቃ

የናሙና ጭነት

30 ሚ.ግ

ግራዲየንት

ጊዜ (ሲቪ)

ሟሟ (%)

ጊዜ (ደቂቃ)

ሟሟ (%)

0

0

0

4

1.0

0

1.0

4

10.0

6

7.5

18

12.5

6

13.0

18

16.5

10

14.0

22

19.0

41

15.5

22

21.0

41

18.0

38

/

/

20.0

38

22.0

87

29.0

87

ሠንጠረዥ 1. ለፍላሽ ማጽዳት የሙከራ ቅንብር.

ውጤቶች እና ውይይት
በመደበኛ C18 አምድ እና በC18AQ አምድ መካከል ያለውን የዋልታ peptide ናሙና የመንጻት አፈጻጸምን ለማነፃፀር፣ ለናሙና ፍላሽ መንጻት እንደ ጅምር መደበኛ C18 አምድ ተጠቀምን።በስእል 2 ላይ እንደሚታየው የC18 ሰንሰለቶች በከፍተኛ የውሃ ሬሾ ምክንያት በተፈጠረው የሃይድሮፎቢክ ምዕራፍ ውድቀት ምክንያት ናሙናው በመደበኛው የC18 ካርትሬጅ ላይ ብዙም ሳይቆይ በተንቀሳቃሽ ስልክ ደረጃ ተለቅቋል።በውጤቱም, ናሙናው በትክክል አልተነጠለም እና አልተጣራም.

ምስል 2. የናሙናው ብልጭታ chromatogram በመደበኛ C18 ካርቶን ላይ።

በመቀጠል, ለናሙናው ፍላሽ ማጽዳት የ C18AQ አምድ ተጠቀምን.በስእል 3 ላይ እንደሚታየው peptide ውጤታማ በሆነ መንገድ በአምዱ ላይ ተጠብቆ ከዚያ ወጥቷል.የታለመው ምርት በጥሬው ናሙና ውስጥ ከሚገኙ ቆሻሻዎች ተለይቷል እና ተሰብስቧል.ከሊፊላይዜሽን በኋላ እና በ HPLC ከተተነተነ በኋላ, የተጣራው ምርት 98.2% ንፅህና አለው እና ለቀጣይ ምርምር እና ልማት የበለጠ ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል.

ምስል 3. የናሙናው ብልጭታ ክሮማቶግራም በC18AQ ካርቶጅ ላይ።

በማጠቃለያው ፣ SepaFlash C18AQ RP ፍላሽ ካርቶን ከፍላሽ ክሮማቶግራፊ ስርዓት ሴፓቢን ጋር ተጣምሯልማሽኑ ጠንካራ የዋልታ ወይም የሃይድሮፊል ናሙናዎችን ለማጣራት ፈጣን እና ውጤታማ መፍትሄ ሊያቀርብ ይችላል።

ስለ SepaFlash C18AQ RP ፍላሽ ካርትሬጅ

ከሳንታይ ቴክኖሎጂ (በሠንጠረዥ 2 ላይ እንደሚታየው) ተከታታይ የSepaFlash C18AQ RP ፍላሽ ካርትሬጅ የተለያዩ መግለጫዎች አሉ።

ንጥል ቁጥር

የአምድ መጠን

የአፈላለስ ሁኔታ

(ሚሊ/ደቂቃ)

ከፍተኛ ግፊት

(psi/ባር)

SW-5222-004-SP(AQ)

5.4 ግ

5-15

400/27.5

SW-5222-012-SP(AQ)

20 ግ

10-25

400/27.5

SW-5222-025-SP(AQ)

33 ግ

10-25

400/27.5

SW-5222-040-SP(AQ)

48 ግ

15-30

400/27.5

SW-5222-080-SP(AQ)

105 ግ

25-50

350/24.0

SW-5222-120-SP(AQ)

155 ግ

30-60

300/20.7

SW-5222-220-SP(AQ)

300 ግ

40-80

300/20.7

SW-5222-330-SP(AQ)

420 ግ

40-80

250/17.2

ሠንጠረዥ 2. SepaFlash C18AQ RP ፍላሽ ካርቶሪዎች.የማሸጊያ እቃዎች: ከፍተኛ-ውጤታማ ሉላዊ C18 (AQ) - ቦንድ ሲሊካ, 20 - 45 μm, 100 Å.

ስለ SepaBean™ ማሽን ዝርዝር መግለጫዎች ወይም በSepaFlash ተከታታይ ፍላሽ ካርትሬጅ ላይ ያለውን የትዕዛዝ መረጃ ለማግኘት እባክዎን ድህረ ገጻችንን ይጎብኙ።


የልጥፍ ጊዜ: ኦክተ-12-2018