Руи Хуан, Бо Сю
Маркази татбиқи R&D
Муқаддима
Пептид як пайвастагиест, ки аз аминокислотаҳо иборат аст, ки ҳар яки онҳо аз сабаби намудҳо ва тартиби гуногуни боқимондаҳои аминокислотаҳо, ки пайдарпаии онро ташкил медиҳанд, хосиятҳои беназири физикӣ ва химиявӣ доранд.Бо инкишофи синтези химиявии фазахои сахт, синтези химиявии пептидхои гуногуни фаъол пешравии калон ба даст овард.Бо вуҷуди ин, аз сабаби таркиби мураккаби пептид, ки бо синтези фазаи сахт ба даст омадааст, маҳсулоти ниҳоӣ бояд бо усулҳои боэътимоди ҷудокунӣ тоза карда шавад.Усулҳои тозакунии пептидҳо, ки маъмулан истифода мешаванд, хроматографияи мубодилаи ионҳо (IEC) ва хроматографияи моеъи баланди фазавии баръакс (RP-HPLC) мебошанд, ки нуқсонҳои иқтидори ками боркунии намуна, арзиши баланди васоити ҷудокунӣ, таҷҳизоти мураккаб ва гаронарзиш доранд. ва ғайра. Барои тозакунии босуръати пептидҳои молекулавии хурд (МВт < 1 кДа), як парвандаи бомуваффақияти ариза қаблан аз ҷониби Santai Technologies нашр шуда буд, ки дар он картриджи SepaFlash RP C18 барои тозакунии босуръати тимопентин (TP-5) ва махсулоти ба талаб чавобгуи максад ба даст оварда шуд.
Расми 1. 20 аминокислотаҳои маъмул (таҷдиди аз www.bachem.com).
20 намуди аминокислотаҳо мавҷуданд, ки дар таркиби пептидҳо маъмуланд.Ин аминокислотаҳо аз рӯи қутбӣ ва хосияти кислотаю асосӣ ба гурӯҳҳои зерин тақсим мешаванд: ғайриқутбӣ (гидрофобӣ), қутбӣ (безаряд), туршӣ ё асосӣ (чунон ки дар расми 1 нишон дода шудааст).Дар пайдарпаии пептидҳо, агар аминокислотаҳои аминокислотаҳои пайдарпай асосан қутбӣ бошанд (тавре ки бо ранги гулобӣ дар расми 1 нишон дода шудааст), аз қабили систеин, глутамин, аспарагин, серин, треонин, тирозин ва ғайра, пас ин пептид метавонад дорои қувваи қавӣ бошад. қутбӣ ва дар об хеле ҳалшаванда аст.Ҳангоми тозакунии ин намунаҳои пептидҳои қутбӣ тавассути хроматографияи баръакс, падидае рух медиҳад, ки суқути фазаи гидрофобӣ номида мешавад (ба ёддошти аризаи қаблан нашршудаи Santai Technologies: фурӯпошии фазаи гидрофобӣ, сутунҳои хроматографияи марҳилаи AQ ва барномаҳои онҳо).Дар муқоиса бо сутунҳои муқаррарии C18, сутунҳои такмилёфтаи C18AQ барои тоза кардани намунаҳои қутбӣ ё гидрофиликӣ мувофиқтаранд.Дар ин паём, як пептиди қутбӣ ҳамчун намуна истифода шуд ва аз ҷониби сутуни C18AQ тоза карда шуд.Дар натиҷа, маҳсулоте, ки ба талабот мувофиқат мекунад, ба даст омад ва онро метавон дар таҳқиқот ва коркарди зерин истифода бурд.
| Асбоб | SepaBean™мошини 2 | |||
| Картриджҳо | 12 г картриджи флеш SepaFlash C18 RP (силика сферикӣ, 20 - 45 мкм, 100 Å, Рақами фармоиш: SW-5222-012-SP) | 12 г картриджи флеши SepaFlash C18AQ RP (силикашакли сферикӣ, 20 - 45 мкм, 100 Å, рақами фармоиш: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Дарозии мавҷ | 254 нм, 220 нм | 214 нм | ||
| Марҳилаи мобилӣ | Маҳлулкунандаи A: Об Халкунанда B: Ацетонитрил | |||
| Суръати ҷараён | 15 мл/дақ | 20 мл/дақ | ||
| Боркунии намуна | 30 мг | |||
| Градиент | Вақт (CV) | ҳалкунанда B (%) | Вақт (дақ) | ҳалкунанда B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Натиҷа ва Гуфтугӯ
Барои муқоиса кардани самаранокии тозакунии намунаи пептиди қутбӣ байни сутуни муқаррарии C18 ва сутуни C18AQ, мо сутуни муқаррарии C18-ро барои тозакунии флеши намуна ҳамчун оғоз истифода бурдем.Тавре ки дар расми 2 нишон дода шудааст, аз сабаби суқути марҳилаи гидрофобии занҷирҳои C18, ки дар натиҷаи таносуби баланди обӣ ба вуҷуд омадааст, намуна дар картриджи муқаррарии C18 базӯр нигоҳ дошта шуд ва мустақиман тавассути фазаи мобилӣ хориҷ карда шуд.Дар натиҷа, намуна ба таври самаранок ҷудо ва тоза карда нашуд.
Расми 2. Хроматограммаи флеши намуна дар картриджи муқаррарии C18.
Баъдан, мо сутуни C18AQ-ро барои тозакунии флеши намуна истифода бурдем.Тавре ки дар расми 3 нишон дода шудааст, пептид дар сутун ба таври муассир нигоҳ дошта шуд ва сипас хориҷ карда шуд.Маҳсулоти мақсаднок аз ифлосиҳо дар намунаи хом ҷудо карда шуд ва ҷамъоварӣ карда шуд.Пас аз лиофилизатсия ва сипас аз ҷониби HPLC таҳлил карда мешавад, маҳсулоти тозашуда 98,2% тозагӣ дорад ва минбаъд метавонад барои таҳқиқот ва таҳияи қадами оянда истифода шавад.
Расми 3. Хроматограммаи флеши намуна дар картриджи C18AQ.
Хулоса, картриджи флеши SepaFlash C18AQ RP дар якҷоягӣ бо системаи флеш хроматографияи SepaBean™мошин метавонад ҳалли зуд ва муассирро барои тоза кардани намунаҳои қутбӣ ё гидрофиликӣ пешниҳод кунад.
Як қатор картриджҳои флеши SepaFlash C18AQ RP бо хусусиятҳои гуногун аз Santai Technology мавҷуданд (тавре ки дар ҷадвали 2 нишон дода шудааст).
| Рақами адад | Андозаи сутун | Меъёри ҷараён (мл/дақ) | Максимум.Фишор (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 г | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 г | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 гр | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 гр | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 гр | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 гр | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 г | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 гр | 40-80 | 250/17.2 |
Ҷадвали 2. Cartridges флеш SepaFlash C18AQ RP.Маводҳои бастабандӣ: Сферии баландсамараи кремнийи C18(AQ)-баста, 20 - 45 мкм, 100 Å.
Барои маълумоти иловагӣ дар бораи мушаххасоти муфассали мошини SepaBean™ ё маълумоти фармоиш дар картриджҳои флешҳои SepaFlash, лутфан ба вебсайти мо муроҷиат кунед.
Вақти фиристодан: октябр-12-2018