Руй Хуан, Бо Сюй
Цэнтр даследаванняў і распрацовак прымянення
Уводзіны
Пептыд - гэта злучэнне, якое складаецца з амінакіслот, кожная з якіх валодае унікальнымі фізічнымі і хімічнымі ўласцівасцямі з-за розных тыпаў і парадку амінакіслотных астаткаў, якія складаюць яе паслядоўнасць.З развіццём цвёрдафазнага хімічнага сінтэзу хімічны сінтэз розных актыўных пептыдаў дасягнуў вялікага прагрэсу.Аднак з-за складанага складу пептыда, атрыманага цвёрдафазным сінтэзам, канчатковы прадукт павінен быць ачышчаны надзейнымі метадамі падзелу.Звычайна выкарыстоўваюцца метады ачысткі пептыдаў, у тым ліку іонаабменная храматаграфія (IEC) і зваротна-фазавая высокаэфектыўная вадкасная храматаграфія (RP-HPLC). і г. д. Для хуткай ачысткі пептыдаў з невялікімі малекуламі (молекулярная маса <1 кДа) кампанія Santai Technologies раней апублікавала паспяховы выпадак прымянення, у якім картрыдж SepaFlash RP C18 выкарыстоўваўся для хуткай ачысткі тымапентыну (TP-5) і атрыманы мэтавы прадукт, які адпавядае патрабаванням.
Малюнак 1. 20 распаўсюджаных амінакіслот (узняты з www.bachem.com).
Ёсць 20 відаў амінакіслот, якія часта ўваходзяць у склад пептыдаў.Гэтыя амінакіслоты можна падзяліць на наступныя групы ў адпаведнасці з іх палярнасцю і кіслотна-асноўнымі ўласцівасцямі: непалярныя (гідрафобныя), палярныя (незараджаныя), кіслотныя або асноўныя (як паказана на малюнку 1).У пептыднай паслядоўнасці, калі амінакіслоты, якія ўтвараюць паслядоўнасць, у асноўным палярныя (як пазначана ружовым колерам на малюнку 1), такія як цыстэін, глютамін, аспарагін, серын, трэанін, тыразін і г.д., тады гэты пептыд можа мець моцную палярнасць і добра растваральныя ў вадзе.Падчас працэдуры ачысткі гэтых моцных узораў палярных пептыдаў з дапамогай храматаграфіі са зваротнай фазай будзе адбывацца з'ява, званае калапсам гідрафобнай фазы (гл. раней апублікаваную нататку аб заяўцы Santai Technologies: калапс гідрафобнай фазы, калонкі храматаграфіі са зваротнай фазай AQ і іх прымяненне).У параўнанні са звычайнымі калонкамі C18, палепшаныя калонкі C18AQ найбольш прыдатныя для ачысткі моцных палярных або гідрафільных узораў.У гэтым паведамленні моцны палярны пептыд быў выкарыстаны ў якасці ўзору і ачышчаны калонкай C18AQ.У выніку атрыманы мэтавы прадукт, які адпавядае патрабаванням і можа быць выкарыстаны ў наступных даследаваннях і распрацоўках.
| інструмент | SepaBean™машына 2 | |||
| Патроны | 12 г SepaFlash C18 RP флэш-картрыдж (сферычны дыяксід крэмнія, 20 - 45 мкм, 100 Å, нумар для замовы: SW-5222-012-SP) | 12 г SepaFlash C18AQ RP флэш-картрыдж (сферычны дыяксід крэмнія, 20 - 45 мкм, 100 Å, нумар для замовы: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Даўжыня хвалі | 254 нм, 220 нм | 214 нм | ||
| Мабільная фаза | Растваральнік А: Вада Растваральнік B: ацэтанітрыл | |||
| Хуткасць патоку | 15 мл/мін | 20 мл/хв | ||
| Загрузка ўзору | 30 мг | |||
| Градыент | Час (CV) | Растваральнік B (%) | Час (мін) | Растваральнік B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10,0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Вынікі і абмеркаванне
Каб параўнаць прадукцыйнасць ачысткі для ўзору палярнага пептыда паміж звычайнай калонкай C18 і калонкай C18AQ, мы выкарысталі звычайную калонку C18 для хуткай ачысткі ўзору ў якасці пачатку.Як паказана на малюнку 2, з-за калапсу гідрафобнай фазы ланцугоў C18, выкліканага высокім водным суадносінамі, узор амаль не затрымліваўся на звычайным картрыджы C18 і непасрэдна вымываўся рухомай фазай.У выніку ўзор не быў эфектыўна аддзелены і ачышчаны.
Малюнак 2. Флэш-хроматаграма ўзору на звычайным картрыджы C18.
Далей мы выкарыстоўвалі калонку C18AQ для флэш-ачысткі ўзору.Як паказана на малюнку 3, пептыд эфектыўна затрымліваўся на калонцы, а затым вымываўся.Мэтавы прадукт быў аддзелены ад прымешак у сырой пробе і сабраны.Пасля ліяфілізацыі і аналізу з дапамогай ВЭЖХ вычышчаны прадукт мае чысціню 98,2% і можа быць выкарыстаны ў далейшым для наступных даследаванняў і распрацовак.
Малюнак 3. Флэш-хроматаграма ўзору на картрыджы C18AQ.
У заключэнне, флэш-картрыдж SepaFlash C18AQ RP у спалучэнні з сістэмай флэш-храматаграфіі SepaBean™машына можа прапанаваць хуткае і эфектыўнае рашэнне для ачысткі моцных палярных або гідрафільных узораў.
Ёсць серыя флэш-картрыджаў SepaFlash C18AQ RP з рознымі характарыстыкамі ад Santai Technology (як паказана ў табліцы 2).
| Нумар прадмета | Памер слупка | Хуткасць патоку (мл/мін) | Макс.ціск (псі/бар) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 г | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 г | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 г | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 г | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 г | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 г | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 г | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 г | 40-80 | 250/17,2 |
Табліца 2. Флэш-картрыджы SepaFlash C18AQ RP.Упаковачныя матэрыялы: высокаэфектыўны сферычны дыяксід крэмнія C18(AQ), 20 - 45 мкм, 100 Å.
Для атрымання дадатковай інфармацыі аб падрабязных характарыстыках машыны SepaBean™ або інфармацыі аб заказе флэш-картрыджаў серыі SepaFlash наведайце наш вэб-сайт.
Час размяшчэння: 12 кастрычніка 2018 г