روی هوانگ، بو خو
مرکز تحقیق و توسعه برنامه
معرفی
پپتید ترکیبی متشکل از اسیدهای آمینه است که هرکدام به دلیل انواع و ترتیب مختلف بقایای اسید آمینه تشکیل دهنده توالی آن دارای خواص فیزیکی و شیمیایی منحصر به فردی هستند.با توسعه سنتز شیمیایی فاز جامد، سنتز شیمیایی پپتیدهای فعال مختلف پیشرفت زیادی داشته است.با این حال، با توجه به ترکیب پیچیده پپتید به دست آمده از سنتز فاز جامد، محصول نهایی باید با روش های جداسازی قابل اطمینان خالص سازی شود.روش‌های تصفیه متداول برای پپتیدها شامل کروماتوگرافی تبادل یونی (IEC) و کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا فاز معکوس (RP-HPLC) است که دارای معایب ظرفیت بارگذاری کم نمونه، هزینه بالای محیط جداسازی، تجهیزات جداسازی پیچیده و پرهزینه است. برای خالص‌سازی سریع پپتیدهای مولکولی کوچک (MW < 1 کیلو دالتون)، قبلاً یک مورد کاربردی موفقیت‌آمیز توسط Santai Technologies منتشر شده بود که در آن از یک کارتریج SepaFlash RP C18 برای خالص‌سازی سریع تیموپنتین (TP-5) و محصول هدف مطابق با الزامات به دست آمد.
شکل 1. 20 اسید آمینه رایج (تولید شده از www.bachem.com).
20 نوع اسید آمینه وجود دارد که در ترکیب پپتیدها رایج هستند.این اسیدهای آمینه را می توان با توجه به قطبیت و خاصیت اسید-باز به گروه های زیر تقسیم کرد: غیر قطبی (آب گریز)، قطبی (بدون بار)، اسیدی یا بازی (همانطور که در شکل 1 نشان داده شده است).در یک توالی پپتیدی، اگر آمینو اسیدهای تشکیل‌دهنده توالی بیشتر از نوع قطبی باشند (همانطور که در شکل 1 با رنگ صورتی مشخص شده‌اند)، مانند سیستئین، گلوتامین، آسپاراژین، سرین، ترئونین، تیروزین و غیره، این پپتید ممکن است دارای خاصیت قوی باشد. قطبیت و بسیار محلول در آب باشد.در طول فرآیند خالص سازی این نمونه های پپتید قطبی قوی با کروماتوگرافی فاز معکوس، پدیده ای به نام فروپاشی فاز آبگریز رخ می دهد (به یادداشت کاربردی قبلی منتشر شده توسط Santai Technologies مراجعه کنید: فروپاشی فاز آبگریز، ستون های کروماتوگرافی فاز معکوس AQ و کاربردهای آنها).در مقایسه با ستون‌های معمولی C18، ستون‌های بهبود یافته C18AQ برای خالص‌سازی نمونه‌های قوی قطبی یا آبدوست مناسب‌تر هستند.در این پست، یک پپتید قطبی قوی به عنوان نمونه مورد استفاده قرار گرفت و توسط یک ستون C18AQ خالص سازی شد.در نتیجه، محصول مورد نظر مطابق با الزامات به دست آمد و می تواند در تحقیق و توسعه زیر مورد استفاده قرار گیرد.
| ابزار | SepaBean™ماشین 2 | |||
| کارتریج | کارتریج فلاش 12 گرمی SepaFlash C18 RP (سیلیکا کروی، 20 - 45 میکرومتر، 100 Å، شماره سفارش：SW-5222-012-SP) | کارتریج فلاش 12 گرمی SepaFlash C18AQ RP (سیلیکا کروی، 20 - 45 میکرومتر، 100 Å، شماره سفارش：SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| طول موج | 254 نانومتر، 220 نانومتر | 214 نانومتر | ||
| فاز موبایل | حلال الف: آب حلال B: استونیتریل | |||
| نرخ جریان | 15 میلی لیتر در دقیقه | 20 میلی لیتر در دقیقه | ||
| بارگذاری نمونه | 30 میلی گرم | |||
| شیب | زمان (CV) | حلال B (%) | زمان (دقیقه) | حلال B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
نتایج و بحث
برای مقایسه عملکرد تصفیه برای نمونه پپتید قطبی بین ستون معمولی C18 و ستون C18AQ، ما از یک ستون معمولی C18 برای تصفیه فلش نمونه به عنوان شروع استفاده کردیم.همانطور که در شکل 2 نشان داده شده است، به دلیل فروپاشی فاز آبگریز زنجیره های C18 ناشی از نسبت آبی بالا، نمونه به سختی روی کارتریج معمولی C18 نگه داشته شد و مستقیماً توسط فاز متحرک شسته شد.در نتیجه، نمونه به طور موثر جدا و خالص نشد.
شکل 2. کروماتوگرام فلش نمونه بر روی یک کارتریج معمولی C18.
در مرحله بعد، از یک ستون C18AQ برای تصفیه فلاش نمونه استفاده کردیم.همانطور که در شکل 3 نشان داده شده است، پپتید به طور موثر بر روی ستون نگه داشته شد و سپس شسته شد.محصول مورد نظر از ناخالصی های موجود در نمونه خام جدا و جمع آوری شد.پس از لیوفیلیزاسیون و سپس آنالیز توسط HPLC، محصول خالص شده دارای خلوص 98.2٪ است و می تواند برای تحقیق و توسعه مرحله بعدی مورد استفاده قرار گیرد.
شکل 3. کروماتوگرام فلش نمونه روی کارتریج C18AQ.
در نتیجه، کارتریج فلش SepaFlash C18AQ RP با سیستم کروماتوگرافی فلش SepaBean ترکیب شده است.™ماشین می تواند یک راه حل سریع و موثر برای خالص سازی نمونه های قوی قطبی یا آبدوست ارائه دهد.
یک سری کارتریج فلش SepaFlash C18AQ RP با مشخصات متفاوت از Santai Technology (همانطور که در جدول 2 نشان داده شده است) وجود دارد.
| شماره مورد | اندازه ستون | نرخ جریان (میلی لیتر در دقیقه) | حداکثر فشار (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 گرم | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 گرم | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 گرم | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 گرم | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 گرم | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 گرم | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 گرم | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 گرم | 40-80 | 250/17.2 |
جدول 2. کارتریج فلش SepaFlash C18AQ RP.مواد بسته بندی: سیلیس کروی با باند C18 (AQ) با کارایی بالا، 20 - 45 میکرومتر، 100 Å.
برای اطلاعات بیشتر در مورد مشخصات دقیق دستگاه SepaBean™ یا اطلاعات سفارش در مورد کارتریج های فلش سری SepaFlash، لطفاً از وب سایت ما دیدن کنید.
زمان ارسال: اکتبر-12-2018