Rui Huang, Bo Xu
Aplika R&D-Centro
Enkonduko
Peptido estas kunmetaĵo kunmetita de aminoacidoj, ĉiu el kiuj havas unikajn fizikajn kaj kemiajn ecojn pro la malsamaj specoj kaj ordo de aminoacidoj restaĵoj konsistigantaj ĝian sekvencon.Kun la disvolviĝo de solidfaza kemia sintezo, la kemia sintezo de diversaj aktivaj peptidoj faris grandan progreson.Tamen, pro la komplika konsisto de la peptido akirita per solidfaza sintezo, la fina produkto devas esti purigita per fidindaj apartigmetodoj.La kutime uzataj purigaj metodoj por peptidoj inkluzivas ion-interŝanĝan kromatografion (IEC) kaj inversan fazan alt-efikan likvan kromatografion (RP-HPLC), kiuj havas la malavantaĝojn de malalta specimena ŝarĝokapacito, alta kosto de disiga amaskomunikilaro, komplika kaj multekosta apartiga ekipaĵo, ktp. Por la rapida purigo de malgrandaj molekulaj peptidoj (MW < 1 kDa), sukcesa aplikaĵa kazo antaŭe estis publikigita fare de Santai Technologies, en kiu SepaFlash RP C18-kartoĉo estis utiligita por la rapida purigo de timopentino (TP-5) kaj la celprodukto plenumanta la postulojn estis akirita.
Figuro 1. 20 oftaj aminoacidoj (reproduktitaj el www.bachem.com).
Estas 20 specoj de aminoacidoj, kiuj estas oftaj en la komponado de peptidoj.Ĉi tiuj aminoacidoj povas esti dividitaj en la sekvajn grupojn laŭ sia poluseco kaj acido-baza propraĵo: nepolusa (hidrofoba), polusa (senŝargita), acida aŭ baza (kiel montrite en Figuro 1).En peptidsekvenco, se la aminoacidoj konsistigantaj la sekvencon estas plejparte polusaj (kiel markite en rozkolora koloro en Figuro 1), kiel ekzemple Cisteino, Glutamino, Asparagino, Serino, Treonino, Tirozino, ktp. tiam ĉi tiu peptido povus havi fortan. poluseco kaj esti tre solvebla en akvo.Dum la puriga proceduro por ĉi tiuj fortaj polusaj peptidaj specimenoj per invers-faza kromatografio, okazos fenomeno nomata hidrofoba faza kolapso (referu al antaŭe publikigita aplikaĵa noto de Santai Technologies: Hidrofoba Faza Kolapso, AQ Reversed Phase Chromatography Columns and Their Applications).Kompare kun la regulaj C18-kolumnoj, la plibonigitaj C18AQ-kolumnoj estas plej taŭgaj por la purigo de fortaj polusaj aŭ hidrofilaj specimenoj.En ĉi tiu afiŝo, forta polusa peptido estis utiligita kiel la specimeno kaj purigita per C18AQ-kolumno.Kiel rezulto, la cela produkto plenumanta la postulojn estis akirita kaj povus esti uzata en la sekva esplorado kaj evoluo.
| Instrumento | SepaBean™maŝino 2 | |||
| Kartoĉoj | 12 g SepaFlash C18 RP fulmkartoĉo (sfera silicoksido, 20 - 45 μm, 100 Å, Ordonumero: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP-fulmkartoĉo (sfera silicoksido, 20 - 45 μm, 100 Å, mendonumero: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Ondolongo | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Movebla fazo | Solvento A: Akvo Solvento B: Acetonitrilo | |||
| Flukvanto | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Ekzempla ŝarĝo | 30 mg | |||
| Gradiento | Tempo (CV) | Solvento B (%) | Tempo (min) | Solvento B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Rezultoj kaj diskuto
Por kompari la purigan agadon por la polusa peptida specimeno inter regula C18-kolumno kaj C18AQ-kolumno, ni uzis regulan C18-kolumnon por la fulmpurigo de la specimeno kiel komenco.Kiel montrite en Figuro 2, pro la hidrofoba fazkolapso de la C18-ĉenoj kaŭzita de alta akva proporcio, la provaĵo estis apenaŭ retenita sur la regula C18-kartoĉo kaj estis rekte eluzita per la mova fazo.Kiel rezulto, la specimeno ne estis efike apartigita kaj purigita.
Figuro 2. La fulm-kromatogramo de la specimeno sur regula C18-kartoĉo.
Poste, ni uzis kolumnon C18AQ por la fulmpurigo de la specimeno.Kiel montrite en Figuro 3, la peptido estis efike retenita sur la kolono kaj tiam eluzita.La cela produkto estis apartigita de la malpuraĵoj en la kruda specimeno kaj kolektita.Post liofiligo kaj poste analizita per HPLC, la purigita produkto havas purecon de 98.2% kaj povus esti plu uzata por sekva paŝo esplorado kaj evoluo.
Figuro 3. La fulm-kromatogramo de la provaĵo sur C18AQ-kartoĉo.
En konkludo, SepaFlash C18AQ RP-fulmkartoĉo kombinita kun la fulm-kromatografiosistemo SepaBean™maŝino povus proponi rapidan kaj efikan solvon por la purigo de fortaj polusaj aŭ hidrofilaj specimenoj.
Estas serio de la SepaFlash C18AQ RP-fulmkartoĉoj kun malsamaj specifoj de Santai Technology (kiel montrite en Tabelo 2).
| Item Nombro | Kolumna Grandeco | Fluo-Indico (ml/min) | Maksimuma.Premo (psi/trinkejo) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tablo 2. SepaFlash C18AQ RP-flash-kartoĉoj.Pakaĵmaterialoj: Alt-efikeca sfera C18(AQ)-ligita siliko, 20 - 45 μm, 100 Å.
Por pliaj informoj pri detalaj specifoj de SepaBean™-maŝino aŭ la mendaj informoj pri fulmaj kartoĉoj de la serio SepaFlash, bonvolu viziti nian retejon.
Afiŝtempo: Oct-12-2018