強力な極性ペプチドの精製における C18AQ カラムの応用

ルイ・ファン、ボー・シュー
アプリケーション研究開発センター

導入
ペプチドはアミノ酸で構成される化合物であり、配列を構成するアミノ酸残基の種類と順序が異なるため、それぞれが独自の物理的および化学的特性を持っています。固相化学合成法の発展により、さまざまな活性ペプチドの化学合成が大きく進歩しました。ただし、固相合成で得られるペプチドの組成は複雑であるため、最終生成物は信頼性の高い分離方法で精製する必要があります。ペプチドの一般的に使用される精製方法には、イオン交換クロマトグラフィー (IEC) および逆相高速液体クロマトグラフィー (RP-HPLC) が含まれますが、これらにはサンプルローディング容量が低い、分離媒体が高価である、分離装置が複雑で高価であるという欠点があります。小分子ペプチド (MW < 1 kDa) の迅速精製については、Santai Technologies によって成功したアプリケーション ケースが以前に発表されました。この事例では、SepaFlash RP C18 カートリッジがチモペンチン (TP-5) と要求を満たす目的の製品が得られました。

図 1. 20 の一般的なアミノ酸 (www.bachem.com から転載)。

ペプチドの構成に共通するアミノ酸は20種類あります。これらのアミノ酸は、その極性と酸塩基特性に応じて、非極性 (疎水性)、極性 (非荷電)、酸性または塩基性のグループに分類できます (図 1 を参照)。ペプチド配列において、配列を構成するアミノ酸のほとんどがシステイン、グルタミン、アスパラギン、セリン、スレオニン、チロシンなどの極性アミノ酸 (図 1 のピンク色でマーク) である場合、このペプチドは強い強度を持つ可能性があります。極性があり、水によく溶けます。逆相クロマトグラフィーによるこれらの強い極性ペプチドサンプルの精製手順中に、疎水性相崩壊と呼ばれる現象が発生します (Santai Technologies が以前に公開したアプリケーション ノート: 疎水性相崩壊、AQ 逆相クロマトグラフィー カラムとそのアプリケーションを参照)。通常の C18 カラムと比較して、改良された C18AQ カラムは、強い極性または親水性サンプルの精製に最適です。この投稿では、強力な極性ペプチドをサンプルとして利用し、C18AQ カラムによって精製しました。その結果、要求を満たす目的の製品が得られ、以下の研究開発に使用することができました。