Rui Huang, Bo Şu
Gözleg we gözleg merkezi
Giriş
Peptid aminokislotalardan ybarat birleşme bolup, olaryň hersiniň yzygiderliligini emele getirýän aminokislotanyň galyndylarynyň dürli görnüşleri we tertibi sebäpli özboluşly fiziki we himiki aýratynlyklary bar.Gaty fazaly himiki sinteziň ösmegi bilen dürli işjeň peptidleriň himiki sintezi uly ösüş gazandy.Şeýle-de bolsa, gaty faza sintezi bilen alnan peptidiň çylşyrymly düzümi sebäpli soňky önüm ygtybarly aýralyk usullary bilen arassalanmalydyr.Peptidler üçin giňden ulanylýan arassalaýyş usullaryna ion çalşygy hromatografiýasy (IEC) we tersi fazaly ýokary öndürijilikli suwuk hromatografiýa (RP-HPLC) girýär, pes nusga ýükleme kuwwatynyň, aýralyk serişdeleriniň bahasynyň ýokary bolmagy, çylşyrymly we gymmat bahaly enjamlar, we ş.m. Ownuk molekulaly peptidleri (MW <1 kDa) çalt arassalamak üçin öň Santai Technologies tarapyndan üstünlikli amaly neşir edildi, timopentini (TP-5) çalt arassalamak üçin SepaFlash RP C18 patrony ulanyldy. talaplaryna laýyk gelýän maksatly önüm alyndy.
Surat 1. 20 umumy aminokislotalar (www.bachem.com-dan köpeldilýär).
Peptidleriň düzüminde giňden ýaýran 20 görnüşli aminokislotalar bar.Bu aminokislotalary polýarlygy we kislotanyň esasy häsiýetine görä aşakdaky toparlara bölmek bolar: polýar däl (gidrofob), polýar (zarýad berilmedik), kislotaly ýa-da esasy (1-nji suratda görkezilişi ýaly).Peptid yzygiderliliginde, yzygiderliligi emele getirýän aminokislotalar esasan sistein, glutamin, asparagin, serine, tronin, tirozin we ş.m. ýaly polýar (1-nji suratda gülgüne reňk bilen bellenen) bolsa, onda bu peptidiň güýçli bolmagy mümkin polýarlygy we suwda gaty erginli bolmak.Ters fazaly hromatografiýa arkaly bu güýçli polýar peptid nusgalaryny arassalamak prosedurasynda gidrofobiki fazanyň çökmegi diýilýän hadysa ýüze çykar (Santai Technologies: Gidrofobiki fazanyň çökmegi, AQ tersine faza hromatografiýa sütünleri we olaryň ulanylyşy).Adaty C18 sütünleri bilen deňeşdirilende, gowulaşan C18AQ sütünleri güýçli polýar ýa-da gidrofil nusgalaryny arassalamak üçin has amatlydyr.Bu ýazgyda nusga hökmünde güýçli polýar peptid ulanyldy we C18AQ sütüni bilen arassalandy.Netijede, talaplara laýyk gelýän maksatly önüm alyndy we indiki gözleglerde we işläp düzmelerde ulanylyp bilner.
| Gural | SepaBean™maşyn 2 | |||
| Kartrijler | 12 g SepaFlash C18 RP fleş kartrij (sferik kremnisi, 20 - 45 μm, 100 Å, Nunber zakaz ： SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP fleş kartrij (sferik kremnisi, 20 - 45 μm, 100 Å, Sargyt belgisi ： SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Tolkun uzynlygy | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Jübi tapgyry | Solvent A: Suw Solvent B: asetonitril | |||
| Akyş tizligi | 15 ml / min | 20 ml / min | ||
| Adingükleme nusgasy | 30 mg | |||
| Gradient | Wagt (CV) | Solvent B (%) | Wagt (min) | Solvent B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Netijeler we çekişme
Polýar peptid nusgasy üçin arassalaýyş öndürijiligini adaty C18 sütüni bilen C18AQ sütüniniň arasynda deňeşdirmek üçin başlangyç hökmünde nusganyň fleş arassalanmagy üçin adaty C18 sütünini ulandyk.2-nji suratda görkezilişi ýaly, ýokary suw gatnaşygy sebäpli dörän C18 zynjyrlarynyň gidrofobiki fazasynyň çökmegi sebäpli, nusga adaty C18 kartrijinde zordan saklandy we göçme faza bilen gönüden-göni çykaryldy.Netijede, nusga täsirli bölünmedi we arassalanmady.
Surat 2. Adaty C18 kartrijdäki nusganyň fleş hromatogrammasy.
Soň bolsa, nusganyň fleş arassalanmagy üçin C18AQ sütünini ulandyk.3-nji suratda görkezilişi ýaly, peptid sütünde täsirli saklandy we soňra çykaryldy.Maksatly önüm çig nusgadaky hapalardan bölünip, ýygnaldy.Lýofilizasiýadan soň we HPLC tarapyndan seljerilenden soň, arassalanan önümiň arassalygy 98,2% bolup, indiki ädim gözleg we ösüş üçin ulanylyp bilner.
Surat 3. C18AQ kartrijdäki nusganyň fleş hromatogrammasy.
Sözümiň ahyrynda, SepaFlash C18AQ RP fleş kartrij, SepaBean fleş hromatografiýa ulgamy bilen birleşdirildi™enjam güýçli polýar ýa-da gidrofil nusgalaryny arassalamak üçin çalt we täsirli çözgüt hödürläp biler.
Santai Technology-den dürli aýratynlyklary bolan SepaFlash C18AQ RP fleş patronlarynyň bir hatary bar (2-nji tablisada görkezilişi ýaly).
| Haryt belgisi | Sütüniň ululygy | Akyş tizligi (mL / min) | Maks (psi / bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 gr | 5-15 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 gr | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 gr | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 gr | 15-30 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 gr | 25-50 | 350 / 24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 gr | 30-60 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 gr | 40-80 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 gr | 40-80 | 250 / 17.2 |
Tablisa 2. SepaFlash C18AQ RP fleş kartrijleri.Gaplamak üçin materiallar: efficiencyokary öndürijilikli sferik C18 (AQ) kremnili, 20 - 45 μm, 100 Å.
SepaBean ™ enjamynyň jikme-jik aýratynlyklary ýa-da SepaFlash seriýaly fleş patronlarynda sargyt maglumatlary barada has giňişleýin maglumat üçin web sahypamyza girmegiňizi haýyş edýäris.
Iş wagty: 12-2018-nji oktýabr