รุ่ยฮวง, โบเสี่ยว
ศูนย์ R&D แอปพลิเคชัน
การแนะนำ
เปปไทด์เป็นสารประกอบที่ประกอบด้วยกรดอะมิโน ซึ่งแต่ละชนิดมีคุณสมบัติทางกายภาพและเคมีเฉพาะตัว เนื่องจากประเภทและลำดับของกรดอะมิโนที่ตกค้างประกอบกันเป็นลำดับที่แตกต่างกันด้วยการพัฒนาของการสังเคราะห์ทางเคมีในเฟสของแข็ง การสังเคราะห์ทางเคมีของเปปไทด์ที่ใช้งานอยู่มีความก้าวหน้าอย่างมากอย่างไรก็ตาม เนื่องจากองค์ประกอบที่ซับซ้อนของเปปไทด์ที่ได้จากการสังเคราะห์ในเฟสของแข็ง ควรทำให้ผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้ายบริสุทธิ์ด้วยวิธีการแยกที่เชื่อถือได้วิธีการทำให้บริสุทธิ์สำหรับเปปไทด์ที่ใช้กันทั่วไป ได้แก่ โครมาโตกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออน (IEC) และโครมาโตกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงแบบเฟสย้อนกลับ (RP-HPLC) ซึ่งมีข้อเสียคือความจุในการโหลดตัวอย่างต่ำ ต้นทุนของสื่อการแยกสูง อุปกรณ์การแยกที่ซับซ้อนและมีราคาแพง เป็นต้น สำหรับการทำให้บริสุทธิ์อย่างรวดเร็วของเปปไทด์โมเลกุลขนาดเล็ก (MW < 1 kDa) กรณีการใช้งานที่ประสบความสำเร็จได้รับการเผยแพร่ก่อนหน้านี้โดย Santai Technologies ซึ่งใช้ตลับ SepaFlash RP C18 สำหรับการทำให้บริสุทธิ์อย่างรวดเร็วของ thymopentin (TP-5) และ ได้ผลิตภัณฑ์เป้าหมายตรงตามข้อกำหนด
รูปที่ 1 กรดอะมิโนทั่วไป 20 ชนิด (คัดลอกมาจาก www.bachem.com)
มีกรดอะมิโน 20 ชนิดที่พบได้ทั่วไปในองค์ประกอบของเปปไทด์กรดอะมิโนเหล่านี้สามารถแบ่งออกเป็นกลุ่มต่อไปนี้ตามความเป็นขั้วและคุณสมบัติของกรดเบส: ไม่มีขั้ว (ไม่ชอบน้ำ), มีขั้ว (ไม่มีประจุ), เป็นกรดหรือเป็นพื้นฐาน (ดังแสดงในรูปที่ 1)ในลำดับเปปไทด์ ถ้ากรดอะมิโนที่สร้างลำดับนั้นส่วนใหญ่เป็นกรดอะมิโนที่มีขั้ว (ตามที่แสดงเป็นสีชมพูในรูปที่ 1) เช่น ซีสเตอีน กลูตามีน แอสพาราจีน เซอรีน ธรีโอนีน ไทโรซีน เป็นต้น เปปไทด์นี้อาจมีความแข็งแกร่ง มีขั้วและละลายน้ำได้สูงในระหว่างขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์สำหรับตัวอย่างเปปไทด์ที่มีขั้วที่แข็งแรงเหล่านี้ด้วยโครมาโตกราฟีแบบเฟสย้อนกลับ จะเกิดปรากฏการณ์ที่เรียกว่าการยุบตัวของเฟสที่ไม่เข้ากับน้ำ (โปรดดูบันทึกการใช้งานที่เผยแพร่ก่อนหน้านี้โดย Santai Technologies: Hydrophobic Phase Collapse, AQ Reversed Phase Chromatography Columns และการประยุกต์ใช้งาน)เมื่อเปรียบเทียบกับคอลัมน์ C18 ทั่วไป คอลัมน์ C18AQ ที่ปรับปรุงแล้วนั้นเหมาะสมที่สุดสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ตัวอย่างที่มีขั้วหรือชอบน้ำในโพสต์นี้ โพลาร์เปปไทด์เข้มข้นถูกใช้เป็นตัวอย่างและทำให้บริสุทธิ์โดยคอลัมน์ C18AQส่งผลให้ได้ผลิตภัณฑ์เป้าหมายตรงตามข้อกำหนดและสามารถนำไปใช้ในการวิจัยและพัฒนาต่อไป
| อุปกรณ์ | เซปาบีน™เครื่อง2 | |||
| ตลับหมึก | ตลับแฟลช SepaFlash C18 RP 12 ก. (ซิลิกาทรงกลม, 20 - 45 μm, 100 Å, Order nunber：SW-5222-012-SP) | ตลับแฟลช SepaFlash C18AQ RP 12 ก. (ซิลิกาทรงกลม, 20 - 45 μm, 100 Å, หมายเลขใบสั่งซื้อ：SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| ความยาวคลื่น | 254 นาโนเมตร, 220 นาโนเมตร | 214 นาโนเมตร | ||
| เฟสมือถือ | ตัวทำละลาย A: น้ำ ตัวทำละลาย B: Acetonitrile | |||
| อัตราการไหล | 15 มล./นาที | 20 มล./นาที | ||
| กำลังโหลดตัวอย่าง | 30 มก | |||
| การไล่ระดับสี | เวลา (CV) | ตัวทำละลาย B (%) | เวลา (นาที) | ตัวทำละลาย B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
ผลลัพธ์และการอภิปราย
ในการเปรียบเทียบประสิทธิภาพการทำให้บริสุทธิ์สำหรับตัวอย่างเปปไทด์ที่มีขั้วระหว่างคอลัมน์ C18 ปกติและคอลัมน์ C18AQ เราใช้คอลัมน์ C18 ปกติสำหรับการทำให้ตัวอย่างบริสุทธิ์แบบแฟลชเป็นจุดเริ่มต้นดังแสดงในรูปที่ 2 เนื่องจากการยุบตัวของเฟสที่ไม่ชอบน้ำของสายโซ่ C18 ที่เกิดจากอัตราส่วนของน้ำที่สูง ตัวอย่างจึงแทบไม่ถูกเก็บไว้บนคาร์ทริดจ์ C18 ปกติและถูกชะออกโดยตรงโดยเฟสเคลื่อนที่เป็นผลให้ตัวอย่างไม่ถูกแยกและทำให้บริสุทธิ์อย่างมีประสิทธิภาพ
รูปที่ 2 แฟลชโครมาโตแกรมของตัวอย่างในคาร์ทริดจ์ C18 ปกติ
ต่อไป เราใช้คอลัมน์ C18AQ สำหรับการทำให้ตัวอย่างบริสุทธิ์แบบแฟลชดังที่แสดงในรูปที่ 3 เปปไทด์ถูกคงไว้อย่างมีประสิทธิภาพในคอลัมน์จากนั้นจึงชะออกผลิตภัณฑ์เป้าหมายถูกแยกออกจากสิ่งเจือปนในตัวอย่างดิบและเก็บรวบรวมหลังจากทำแห้งเยือกแข็งแล้ววิเคราะห์โดย HPLC ผลิตภัณฑ์ที่บริสุทธิ์มีความบริสุทธิ์ 98.2% และสามารถนำไปใช้เพิ่มเติมสำหรับการวิจัยและพัฒนาขั้นต่อไป
รูปที่ 3 แฟลชโครมาโตแกรมของตัวอย่างบนคาร์ทริดจ์ C18AQ
สรุปได้ว่าตลับแฟลช SepaFlash C18AQ RP รวมกับระบบโครมาโตกราฟีแฟลช SepaBean™เครื่องสามารถเสนอวิธีแก้ปัญหาที่รวดเร็วและมีประสิทธิภาพสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของตัวอย่างที่มีขั้วหรือชอบน้ำ
มีตลับแฟลช SepaFlash C18AQ RP หลายชุดที่มีคุณสมบัติแตกต่างจาก Santai Technology (ดังแสดงในตารางที่ 2)
| หมายเลขรายการ | ขนาดคอลัมน์ | อัตราการไหล (มล./นาที) | แรงดันสูงสุด (ปอนด์/บาร์) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 ก | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 ก | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 ก | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 ก | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 ก | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 ก | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 กรัม | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 ก | 40-80 | 250/17.2 |
ตารางที่ 2. ตลับแฟลช SepaFlash C18AQ RPวัสดุบรรจุภัณฑ์: ซิลิกา C18(AQ) ทรงกลมประสิทธิภาพสูง, 20 - 45 μm, 100 Å
สำหรับข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับข้อมูลจำเพาะโดยละเอียดของเครื่อง SepaBean™ หรือข้อมูลการสั่งซื้อตลับแฟลช SepaFlash series โปรดไปที่เว็บไซต์ของเรา
เวลาโพสต์: ต.ค. 12-2018