Rui Huang, Bo Xu
Ohun elo R&D Center
Ifaara
A peptide jẹ agbopọ ti o ni awọn amino acids, ọkọọkan eyiti o ni awọn ohun-ini alailẹgbẹ ti ara ati kemikali nitori awọn oriṣiriṣi oriṣiriṣi ati aṣẹ ti awọn iṣẹku amino acid ti o jẹ ọna rẹ.Pẹlu idagbasoke ti iṣelọpọ kemikali alakoso ti o lagbara, iṣelọpọ kemikali ti ọpọlọpọ awọn peptides ti nṣiṣe lọwọ ti ni ilọsiwaju nla.Bibẹẹkọ, nitori akopọ idiju ti peptide ti a gba nipasẹ iṣelọpọ alakoso to lagbara, ọja ikẹhin yẹ ki o di mimọ nipasẹ awọn ọna iyapa igbẹkẹle.Awọn ọna iwẹnumọ ti a lo nigbagbogbo fun awọn peptides pẹlu chromatography paṣipaarọ ion (IEC) ati kiromatogirafi iṣẹ agbara giga-iyipada (RP-HPLC), eyiti o ni awọn aila-nfani ti agbara ikojọpọ apẹẹrẹ kekere, idiyele giga ti media Iyapa, idiju ati ohun elo iyapa idiyele, Fun iwẹwẹ iyara ti awọn peptides molecule kekere (MW <1 kDa), ọran ohun elo aṣeyọri ni a ti tẹjade tẹlẹ nipasẹ Santai Technologies, ninu eyiti a ti lo katiriji SepaFlash RP C18 fun isọsọ di mimọ ti thymopentin (TP-5) ati ọja afojusun pade awọn ibeere ti a gba.
Ṣe nọmba 1. 20 amino acids ti o wọpọ (ti a ṣe lati www.bachem.com).
Awọn oriṣi 20 ti amino acids wa ti o wọpọ ni akojọpọ awọn peptides.Awọn amino acids wọnyi ni a le pin si awọn ẹgbẹ wọnyi ni ibamu si polarity wọn ati ohun-ini ipilẹ-acid: ti kii-pola (hydrophobic), pola (ti ko gba agbara), ekikan tabi ipilẹ (gẹgẹbi a ṣe han ni Figure 1).Ni ọna peptide kan, ti awọn amino acids ti o jẹ ọna ti o tẹle jẹ awọn pola pupọ julọ (gẹgẹbi a ti samisi ni awọ Pink ni Nọmba 1), gẹgẹbi Cysteine, Glutamine, Asparagine, Serine, Threonine, Tyrosine, bbl lẹhinna peptide yii le ni agbara ti o lagbara. polarity ati ki o jẹ gíga tiotuka ninu omi.Lakoko ilana ìwẹnumọ fun awọn ayẹwo peptide pola ti o lagbara nipasẹ kiromatografi-iyipada, iṣẹlẹ kan ti a pe ni iṣubu ipele hydrophobic yoo waye (tọka si akọsilẹ ohun elo ti a tẹjade tẹlẹ nipasẹ Awọn Imọ-ẹrọ Santai: Ipapọ Ipele Hydrophobic, AQ Yipada Ipele Chromatography Awọn ọwọn ati Awọn ohun elo Wọn).Ti a bawe pẹlu awọn ọwọn C18 deede, awọn ọwọn C18AQ ti o dara julọ dara julọ fun isọdọtun ti pola ti o lagbara tabi awọn ayẹwo hydrophilic.Ninu ifiweranṣẹ yii, peptide pola to lagbara ni a lo bi apẹẹrẹ ati mimọ nipasẹ iwe C18AQ kan.Bi abajade, ọja ibi-afẹde ipade awọn ibeere ni a gba ati pe o le ṣee lo ninu iwadii ati idagbasoke atẹle.
| Irinse | SepaBean™ẹrọ 2 | |||
| Awọn katiriji | 12 g SepaFlash C18 RP filasi katiriji (yanrin iyipo, 20 - 45 μm, 100 Å, Bere fun nunber: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ RP katiriji filasi (silika iyipo, 20 - 45 μm, 100 Å, Nọmba aṣẹ: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Igi gigun | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobile alakoso | Solusan A: Omi Solusan B: Acetonitrile | |||
| Oṣuwọn sisan | 15 milimita / min | 20 milimita / min | ||
| Apeere ikojọpọ | 30 mg | |||
| Ilọsiwaju | Àkókò (CV) | Solusan B (%) | Akoko (iṣẹju) | Solusan B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Awọn abajade ati ijiroro
Lati ṣe afiwe iṣẹ iwẹnumọ fun apẹẹrẹ peptide pola laarin iwe C18 deede ati iwe C18AQ, a lo iwe C18 deede fun isọsọ filasi ti apẹẹrẹ bi ibẹrẹ.Gẹgẹbi o ti han ni Nọmba 2, nitori iṣubu alakoso hydrophobic ti awọn ẹwọn C18 ti o fa nipasẹ ipin olomi giga, a ti fi ayẹwo naa ni idaduro lori katiriji C18 deede ati pe o ti jade taara nipasẹ apakan alagbeka.Bi abajade, ayẹwo naa ko ni iyasọtọ daradara ati mimọ.
Ṣe nọmba 2. Kromatogram filasi ti apẹẹrẹ lori katiriji C18 deede.
Nigbamii ti, a lo iwe C18AQ fun iwẹnumọ filasi ti ayẹwo naa.Gẹgẹbi a ṣe han ni Nọmba 3, peptide naa ni idaduro daradara lori ọwọn ati lẹhinna yọ jade.Ọja ibi-afẹde ti yapa lati awọn aimọ ti o wa ninu ayẹwo aise ati pe o gba.Lẹhin lyophilization ati lẹhinna ṣe atupale nipasẹ HPLC, ọja ti a sọ di mimọ ni 98.2% ati pe o le ṣee lo siwaju fun iwadii igbesẹ ti nbọ ati idagbasoke.
Ṣe nọmba 3. Kromatogram filasi ti apẹẹrẹ lori katiriji C18AQ.
Ni ipari, SepaFlash C18AQ RP katiriji filasi ni idapo pẹlu eto chromatography filasi SepaBean™Ẹrọ le funni ni iyara ati ojutu ti o munadoko fun isọdi ti pola ti o lagbara tabi awọn ayẹwo hydrophilic.
Awọn jara ti awọn katiriji filasi SepaFlash C18AQ RP pẹlu oriṣiriṣi awọn pato lati Imọ-ẹrọ Santai (bii o han ni Tabili 2).
| Nọmba Nkan | Iwọn Iwọn | Oṣuwọn sisan (milimita/iṣẹju) | O pọju.Titẹ (psi/ọgọ) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Table 2. SepaFlash C18AQ RP filasi katiriji.Awọn ohun elo iṣakojọpọ: C18 (AQ) ti o ni agbara-giga ti o ni asopọ silica, 20 - 45 μm, 100 Å.
Fun alaye siwaju sii lori awọn alaye ni pato ti ẹrọ SepaBean™, tabi alaye aṣẹ lori awọn katiriji filasi jara SepaFlash, jọwọ ṣabẹwo si oju opo wẹẹbu wa.
Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu Kẹwa 12-2018