Notkun C18AQ dálka við hreinsun sterkra skautpeptíðs

Rui Huang, Bo XU
R & D miðstöð umsóknar

INNGANGUR
Peptíð er efnasamband sem samanstendur af amínósýrum, sem hver um sig hefur einstaka eðlisfræðilega og efnafræðilega eiginleika vegna mismunandi gerða og röð amínósýruleifa sem mynda röð þess. Með þróun efnafræðilegrar myndunar á föstu fasa hefur efnafræðileg myndun ýmissa virkra peptíðs náð miklum framförum. Vegna flókinnar samsetningar peptíðsins sem fæst með fasa myndun, ætti að hreinsa lokaafurðina með áreiðanlegum aðskilnaðaraðferðum. Algengar hreinsunaraðferðir fyrir peptíð eru með jónaskipti litskiljun (IEC) og snúið við áfanga hágæða vökvaskiljun (RP-HPLC), sem hafa ókosti við lágt sýnishornsgetu, mikill kostnaður við aðskilnaðarmiðla, flókinn og kostnaðarsama aðskilnaðarbúnað, osfrv. Fyrir ört hreinsun var áður birt með Peptides (MW <1 kDa), árangursríkt umsóknarhöfðun áður með Santai (MW <1 Tækni, þar sem Sepaflash RP C18 skothylki var notuð til að hrífa thymopentin (TP-5) og markafurðin sem uppfyllti kröfurnar fengust.

Mynd 1. 20 Algengar amínósýrur (endurskapaðar frá www.bachem.com).

Það eru 20 tegundir af amínósýrum sem eru algengar í samsetningu peptíðs. Þessum amínósýrum er hægt að skipta í eftirfarandi hópa í samræmi við skautun þeirra og sýru-base eiginleika: ekki skautaður (vatnsfælinn), skautaður (óhleðður), súr eða grunn (eins og sýnt er á mynd 1). Í peptíðröð, ef amínósýrurnar sem mynda röðina eru að mestu leyti skautaðar (eins og merktar eru í bleikum lit á mynd 1), svo sem cystein, glútamíni, asparagíni, seríni, þreóníni, týrósíni osfrv. Þá gæti þetta peptíð haft sterka skautun og verið mjög leysan í vatni. Meðan á hreinsunaraðferðinni stendur fyrir þessi sterku skautapeptíðsýni með afturfasa litskiljun, mun fyrirbæri sem kallast vatnsfælna fasa hrun eiga sér stað (sjá áður birt umsóknar athugasemd með Santai tækni: vatnsfælni fasa hrun, snýr AQ við fasa litskiljunarsúlum og umsóknum þeirra). Í samanburði við venjulega C18 súlurnar eru bættir C18AQ dálkar henta best til að hreinsa sterkt skautað eða vatnssækna sýni. Í þessari færslu var sterkt pólska peptíð notað sem sýnið og hreinsað með C18AQ dálki. Fyrir vikið var markafurðin sem uppfyllti kröfurnar fengnar og hægt var að nota þær í eftirfarandi rannsóknum og þróun.