A aplicación de columnas C18AQ na purificación de péptidos polares fortes

Rui Huang, Bo Xu
Centro de I + D de aplicación

Introdución
Un péptido é un composto composto por aminoácidos, cada un deles ten propiedades físicas e químicas únicas debido aos diferentes tipos e á orde de residuos de aminoácidos que constitúen a súa secuencia. Co desenvolvemento de síntese química en fase sólida, a síntese química de varios péptidos activos avanzou moito. Non obstante, debido á complicada composición do péptido obtido por síntese de fase sólida, o produto final debería purificarse mediante métodos de separación fiables. Os métodos de purificación comúnmente usados ​​para péptidos inclúen cromatografía de intercambio iónico (IEC) e cromatografía líquida de alto rendemento en fase invertida (RP-HPLC), que teñen os inconvenientes da baixa capacidade de carga de mostras, alto custo de soporte de separación, complicados e custosos equipos de separación, etc. Para a aplicación rápida de Purificación de pequenas moléculas por santil (1 kDa), un caso de santil. Tecnoloxías, nas que se utilizou un cartucho de sepaflash RP C18 para a rápida purificación de timopentina (TP-5) e o produto obxectivo que cumpría os requisitos.

Figura 1. 20 Aminoácidos comúns (reproducidos a partir de www.bachem.com).

Hai 20 tipos de aminoácidos comúns na composición dos péptidos. Estes aminoácidos pódense dividir nos seguintes grupos segundo a súa propiedade polaridade e ácida-base: non polar (hidrofóbica), polar (sen cargar), ácida ou básica (como se mostra na figura 1). Nunha secuencia de péptidos, se os aminoácidos que constitúen a secuencia son maioritariamente polares (como marcados en cor rosa na figura 1), como a cisteína, a glutamina, a asparagina, a serina, a treonina, a tirosina, etc. entón este péptido pode ter unha forte polaridade e ser altamente soluble en auga. Durante o procedemento de purificación para estas fortes mostras de péptidos polares mediante cromatografía en fase revertida, producirase un fenómeno chamado colapso de fase hidrofóbica (refírese a unha nota de aplicación publicada anteriormente por Santai Technologies: Hydrophobe Fase Colapse, AQ revertido en fase de columnas de cromatografía e aplicacións). En comparación coas columnas C18 regulares, as columnas C18AQ melloradas son máis adecuadas para a purificación de mostras polares ou hidrofílicas fortes. Neste post, un forte péptido polar foi utilizado como a mostra e purificado por unha columna C18AQ. Como resultado, o produto obxectivo que cumpría os requisitos obtívose e podería usarse na seguinte investigación e desenvolvemento.