Rui Huang, Bo Xu
Aplika R & D -Centro
Enkonduko
Peptido estas komponaĵo kunmetita de aminoacidoj, ĉiu el kiuj havas unikajn fizikajn kaj kemiajn proprietojn pro la diversaj specoj kaj ordo de aminoacidaj restaĵoj konsistigantaj sian sekvencon. Kun la disvolviĝo de kemia sintezo de solida fazo, la kemia sintezo de diversaj aktivaj peptidoj multe progresis. Tamen, pro la komplika konsisto de la peptido akirita per solida fazo -sintezo, la fina produkto devas esti purigita per fidindaj apartigaj metodoj. La komune uzataj purigaj metodoj por peptidoj inkluzivas ion-interŝanĝan kromatografion (IEC) kaj inversigi-fazan altan rendimentan likvan kromatografion (RP-HPLC), kiuj havas la malavantaĝojn de malalta specimena ŝarĝa kapablo, alta kosto de apartiga amaskomunikilaro, komplikaj kaj pli ol 1-a de la malpliiĝoj, kaj pli ol la malpli ol la malpli ol la malpli ol mi estas, ke la malpli ol la malpli ol la malpli ol la malpli ol la malpli ol la malpli ol mi estas. Sepaflash RP C18-kartoĉo estis utiligita por la rapida purigo de timopentino (TP-5) kaj la celata produkta kunveno la postuloj estis akirita.
Figuro 1. 20 Komunaj aminoacidoj (reproduktitaj el www.bachem.com).
Estas 20 specoj de aminoacidoj, kiuj estas oftaj en la konsisto de peptidoj. Ĉi tiuj aminoacidoj povas esti dividitaj en la jenajn grupojn laŭ sia polaridad kaj acid-baza posedaĵo: nepolusa (hidrofoba), polusa (neŝarĝita), acida aŭ baza (kiel montras Figuro 1). En peptida sekvenco, se la aminoacidoj konsistigantaj la sekvencon estas plejparte polusaj (kiel markitaj en rozkolora koloro en Figuro 1), kiel cisteino, glutamino, asparagino, serino, treonino, tirozino, ktp. Tiam ĉi tiu peptido povus havi fortan polaridad kaj esti tre solvebla en akvo. Dum la puriga proceduro por ĉi tiuj fortaj polusaj peptidaj specimenoj per renversita fazo-kromatografio, fenomeno nomata hidrofoba fazo-kolapso okazos (raportu antaŭe publikigitan aplikon-noton de Santai Technologies: Hidrofoba fazo-kolapso, AQ-inversigita fazo-kromatografiaj kolumnoj kaj iliaj aplikoj). Kompare kun la regulaj C18 -kolumnoj, la plibonigitaj C18AQ -kolumnoj estas plej taŭgaj por la purigado de fortaj polusaj aŭ hidrofilaj specimenoj. En ĉi tiu poŝto, forta polusa peptido estis uzata kiel la specimeno kaj purigita per C18AQ -kolumno. Rezulte, la celata produkta plenumado de la postuloj estis akirita kaj povus esti uzata en la sekva esplorado kaj disvolviĝo.
| Instrumento | Apartiga™Maŝino 2 | |||
| Kartoĉoj | 12 G Sepaflash C18 RP Flash-kartoĉo (sfera siliko, 20-45 μm, 100 Å, ordo Nunber ： SW-5222-012-SP) | 12 G Sepaflash C18AQ RP Flash-kartoĉo (sfera siliko, 20-45 μm, 100 Å, ordo-nombro ： SW-5222-012-SP (aq)) | ||
| Ondolongo | 254 Nm, 220 Nm | 214 Nm | ||
| Poŝtelefona Fazo | Solvilo A: Akvo Solva B: Acetonitrilo | |||
| Fluokvanto | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Specimeno ŝarĝante | 30 mg | |||
| Gradiento | Tempo (CV) | Solvilo B (%) | Tempo (min) | Solvilo B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Rezultoj kaj Diskuto
Por kompari la purigan rendimenton por la polusa peptida specimeno inter regula C18 -kolumno kaj C18AQ -kolumno, ni utiligis regulan C18 -kolumnon por la ekbrila purigo de la specimeno kiel komenco. Kiel montrite en Figuro 2, pro la hidrofoba fazo -kolapso de la C18 -ĉenoj kaŭzitaj de alta akva rilatumo, la specimeno apenaŭ estis konservita sur la regula C18 -kartoĉo kaj estis rekte eluzita de la movebla fazo. Rezulte, la specimeno ne estis efike apartigita kaj purigita.
Figuro 2. La ekbrila kromatogramo de la specimeno sur regula C18 -kartoĉo.
Tuj poste, ni uzis C18AQ -kolumnon por la ekbrila purigo de la specimeno. Kiel montrite en Figuro 3, la peptido estis efike retenita sur la kolumno kaj tiam eluzita. La cela produkto estis apartigita de la malpuraĵoj en la kruda specimeno kaj kolektita. Post liofilizado kaj poste analizita de HPLC, la purigita produkto havas purecon de 98,2% kaj povus esti plue uzata por sekva paŝo esplorado kaj disvolviĝo.
Figuro 3. La ekbrila kromatogramo de la specimeno sur C18AQ -kartoĉo.
Konklude, sepaflash C18AQ RP Flash -kartoĉo kombinita kun la Flash -kromatografia sistemo SepAbean™Maŝino povus oferti rapidan kaj efikan solvon por purigado de fortaj polusaj aŭ hidrofilaj specimenoj.
Ekzistas serio de la Flash -kartoĉoj de Seaflash C18AQ RP kun malsamaj specifoj de Santai -teknologio (kiel montrite en Tabelo 2).
| Item Numero | Kolumna grandeco | Fluokvanto (ml/min) | Max.pressure (PSI/Trinkejo) |
| SW-5222-004-SP (aq) | 5.4 G | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 G | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (aq) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (aq) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (aq) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabelo 2. Sepaflash C18AQ RP Flash -kartoĉoj. Pakaj Materialoj: Alt-efika sfera C18 (AQ) -Bondita siliko, 20-45 μm, 100 Å.
Por pliaj informoj pri detalaj specifoj de SepABean ™ Maŝino, aŭ la mendaj informoj pri Flash -seriaj kartoĉoj, bonvolu viziti nian retejon.
Afiŝotempo: Okt-12-2018