Rui Huang, BO XU
Centru di l'applicazione R & D
Introduzione
Un Popukde hè un cumpostu l'appusciu, ognuna hà proprietà fisiche è chimichi dopu à l'ordine di sfarente residui custituiti a so sequenza. Cù u sviluppu di sintesi chimica solida di fasa, a sintesi chimica di diversi Peptidi attivi hà fattu un grande prugressu. Tuttavia, à causa di a cumpusizioni cumplicata di u felli si uttenuti da sintesi di fase soleanu duverà esse purificendu metudi di separazione affidabile. U metudi di purificazione cumunemente percorsi includendu cromatografia di scambiu di odiu (IC) è di moltu di separazione, è à a pusizione rapida persidati (MW <1 KDA), un casu rapidu per a dumanda A tecnulugia Santai, in quale una carcellula di SEPAFASH RP C18 hè stata aduprata per a purificazione rapida di a tinta (TP-5) è u pruduttu di destinazione hè stata ottenuta.
Figura 1. 20 Amino cumuni di Amino (riprudutta da www.bachem.com).
Ci hè 20 tippi di aminoacidi chì sò cumuni in a cumpusizioni di peptidi. Sti amino acidi ponu esse divisi in i seguenti gruppi secondu a so pruprietà polarità è acidu-base (idrofhobic), polarificatu), acidu (cummediata (cum'è mostratu in Figura 1). In una sequenza peptiva, se l'infinici chì custituiscenu a sequita sò principalmente polariali (in figura 1), glocagina, ishteina, escu quant'è i cinchio chì questu peptide puderia avè una forte polacone è esse altròmu in acqua. Durante i pugliura di a purificazione per questi mostri di pisaggio di puriza polariera da una calamazione di fase in campatica in fenenu quadru di colomba di pollomone è e so applicazioni fasi di fase è e so applicazioni? Comparatu cù e colonne C18 regulare, l'colonne C18AQ migliurò sò più adattate per a purificazione di e mostri di polari o idrophilichi idropi. In questu post, una forte peptide polar hè stata aduprata cum'è a mostra è purificata da una colonna C18Q. Per via di u risultatu, u pruduttu di destinazione riunisce i requisiti hè statu ottenutu è puderia esse usatu in a seguente ricerca è sviluppu.
| Strumentu | Sepabean™macchina 2 | |||
| Cartucci | 12 G Sepaflash C18 Rp Car cavallu (20 - 45 μm, 100 Å, ordine nel nunber: sw-sp) | 12 G Sepaflash C18AQ RP Flash Cartasridge (45 μm, 100 Å, numeru d'ordine: sw-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Lunghezza d'onda | 254 NM, 220 nm | 214 NM | ||
| Fase mobile | Solventu A: Acqua Solvente b: acetonitrile | |||
| Rate di flussu | 15 ml / min | 20 ml / min | ||
| Carica di mostra | 30 mg | |||
| Gradoente | Tempu (CV) | Solventu B (%) | Tempu (min) | Solventu B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12,5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16,5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21,0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20,0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29,0 | 87 | |||
Risultati è discussione
Per paragà a prestazione di purificazione per a mostra di a pettona di u polar è di a colonna C18 di C18 di Regula è C18AQ di colonna, avemu adupratu una pupulazione di C18 regulare per a mudificazione in flash regulare di l'iniziu. Comu affissatu in a Figura 2, a causa di a fase idrofhobica di e catene C18 causata da altezza actazione di u cartucellu è statu direttamente eliminatu da a fasa mubuli. Per via di u risultatu, a mostra ùn si separava micca efficace è purificata.
Figura 2. U cromatogramma flash di a mostra nantu à un cartuccia regulare c18.
In seguitu, avemu usatu una colonna C18Q per a purificazione flash di a mostra. Comu mostra in a Figura 3, u POPPIDU hè statu in modu efficace in a colonna è dopu elute. U pruduttu di destinazione hè statu separatu da l'impurità in a mostra cruda è recullata. Dopu lioneofilizzazione è poi analizata da HPLC, u pruduttu purificatu hà una purificazione di 98,2% è puderia esse più utilizati per a ricerca in prossimu passu è u sviluppu.
Figura 3. U cromatogramma flash di u mostra nantu à un cartuccia C18AQ.
In cunclusione, Secaflash C18AQ rp flash cartuccia cumminata cù u sistema di cromatografia flash sepabean™a macchina puderia offre una soluzione rapida è efficace per a purificazione di forti polari o mostri idrophilichi.
Ci sò una seria di a Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridges cun diverse specifiche da a tecnulugia di Santa di Santa?
| Numeru d'elementu | Dimensione di colonna | Rate di flussu (ml / min) | Max.pressa (psi / bar) |
| Sw-5222-004-SP (AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400 / 27,5 |
| Sw-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 anni | 400 / 27,5 |
| LW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 anni | 400 / 27,5 |
| Sw-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400 / 27,5 |
| Sw-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350 / 24,0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/ 20.7 |
| SWA-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/ 20.7 |
| Sw-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250 / 17.2 |
Tabella 2. Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridges. Materiale per l'imballatrice: Silici alta-efficienza C18 (AQ) Silica -bondata, 20 - 45 μm, 100 å.
Per più infurmazione nantu à e specificazioni detallate di mutom di Sepabean ™, o l'infurmazioni d'ordine nantu à e spettaculi di a Sepaflash, per piacè visità u nostru situ web.
Tempu post: 12-2018