Haber Banner'ı

Haberler

Asidik Bileşiklerin Saflaştırılmasında SepaFlash Güçlü Anyon Değişim Kromatografi Kolonlarının Uygulanması

SepaFlash Strong Uygulaması

Rui Huang, Bo Xu
Uygulama Ar-Ge Merkezi

giriiş
İyon değiştirme kromatografisi (IEC), çözelti içinde iyonik formda sunulan bileşikleri ayırmak ve saflaştırmak için yaygın olarak kullanılan bir kromatografik yöntemdir.Değiştirilebilir iyonların farklı yük durumlarına göre IEC, katyon değişim kromatografisi ve anyon değişim kromatografisi olmak üzere iki türe ayrılabilir.Katyon değişim kromatografisinde asidik gruplar ayırma ortamının yüzeyine bağlanır.Örneğin, sülfonik asit (-SO3H), H+'yı ayrıştıran güçlü katyon değişiminde (SCX) yaygın olarak kullanılan bir gruptur ve negatif yüklü grup -SO3- böylece çözeltideki diğer katyonları adsorbe edebilir.Anyon değiştirme kromatografisinde alkalin gruplar ayırma ortamının yüzeyine bağlanır.Örneğin, kuaterner amin (-NR3OH, burada R, hidrokarbon grubudur) genellikle güçlü anyon değişiminde (SAX) kullanılır; bu, OH-'yi ayrıştırır ve pozitif yüklü -N+R3 grubu, çözeltideki diğer anyonları adsorbe edebilir, bu da anyonun oluşmasına neden olur. değişim etkisi.

Doğal ürünler arasında yer alan flavonoidler, kardiyovasküler hastalıkların önlenmesi ve tedavisindeki rolleri nedeniyle araştırmacıların ilgisini çekmiştir.Flavonoid molekülleri fenolik hidroksil gruplarının varlığından dolayı asidik olduğundan iyon değişim kromatografisi, bu asidik bileşiklerin ayrılması ve saflaştırılması için geleneksel normal faz veya ters faz kromatografisine ek olarak alternatif bir seçenektir.Flaş kromatografisinde iyon değişimi için yaygın olarak kullanılan ayırma ortamı, iyon değişim gruplarının yüzeyine bağlandığı silika jel matrisidir.Flaş kromatografisinde en yaygın kullanılan iyon değiştirme modları SCX (genellikle sülfonik asit grubu) ve SAX'tır (genellikle dördüncül amin grubu).Santai Technologies'in daha önce yayınladığı “Alkali Bileşiklerin Saflaştırılmasında SepaFlash Güçlü Katyon Değişim Kromatografi Kolonlarının Uygulanması” başlıklı başvuru notunda, alkali bileşiklerin saflaştırılmasında SCX kolonları kullanıldı.Bu yazıda, asidik bileşiklerin saflaştırılmasında SAX kolonlarının uygulanmasını araştırmak için örnek olarak nötr ve asidik standartlardan oluşan bir karışım kullanıldı.

Deneysel Bölüm

Şekil 1. SAX ayırma ortamının yüzeyine bağlanan sabit fazın şematik diyagramı.

Bu yazıda, dörtlü amin bağlı silika ile önceden paketlenmiş bir SAX kolonu kullanıldı (Şekil 1'de gösterildiği gibi).Saflaştırılacak numune olarak Kromon ve 2,4-dihidroksibenzoik asit karışımı kullanıldı (Şekil 2'de gösterildiği gibi).Karışım metanol içerisinde çözüldü ve bir enjektör aracılığıyla flaş kartuşuna yüklendi.Flaş saflaştırmanın deneysel kurulumu Tablo 1'de listelenmiştir.

Şekil 2. Numune karışımındaki iki bileşenin kimyasal yapısı.

Enstrüman

SepaBean™ makinesi T

Kartuşlar

4 g SepaFlash Standard Serisi flaş kartuşu (düzensiz silika, 40 - 63 μm, 60 Å, Sipariş numarası: S-5101-0004)

4 g SepaFlash Bonded Serisi SAX flaş kartuşu (düzensiz silika, 40 - 63 μm, 60 Å, Sipariş numarası: SW-5001-004-IR)

Dalgaboyu

254 nm (tespit), 280 nm (izleme)

Mobil aşama

Çözücü A: N-heksan

Çözücü B: Etil asetat

Akış hızı

30 mL/dak

20 mL/dak

Örnek yükleme

20 mg (A Bileşeni ve B Bileşeni karışımı)

Gradyan

Zaman (CV)

Çözücü B (%)

Zaman (CV)

Çözücü B (%)

0

0

0

0

1.7

12

14

100

3.7

12

/

/

16

100

/

/

18

100

/

/

Sonuçlar ve tartışma

İlk olarak numune karışımı, normal silika ile önceden paketlenmiş normal fazlı bir flaş kartuşu ile ayrıldı.Şekil 3'te gösterildiği gibi, numunedeki iki bileşen kartuştan birbiri ardına elüt edilmiştir.Daha sonra numunenin saflaştırılması için bir SAX flaş kartuşu kullanıldı.Şekil 4'te gösterildiği gibi asidik Bileşen B, SAX kartuşunda tamamen tutuldu.Nötr Bileşen A, mobil fazın elüsyonu ile kademeli olarak kartuştan elüe edildi.

Şekil 3. Normal fazlı bir kartuş üzerindeki numunenin flaş kromatogramı.

Şekil 4. Bir SAX kartuşundaki numunenin flaş kromatogramı.
Şekil 3 ve Şekil 4 karşılaştırıldığında, Bileşen A'nın iki farklı flaş kartuşunda tutarsız tepe şekli vardır.Elüsyon zirvesinin bileşene karşılık gelip gelmediğini doğrulamak için SepaBean™ makinesinin kontrol yazılımında yerleşik olan tam dalga boyu tarama özelliğini kullanabiliriz.İki ayırmanın deneysel verilerini açın, kromatogramdaki zaman ekseni (CV) üzerindeki gösterge çizgisine, Bileşen A'ya karşılık gelen elüsyon zirvesinin en yüksek noktasına ve ikinci en yüksek noktasına ve bu ikisinin tam dalga boyu spektrumuna sürükleyin. noktalar otomatik olarak kromatogramın altında gösterilecektir (Şekil 5 ve Şekil 6'da gösterildiği gibi).Bu iki ayırmanın tam dalga boyu spektrum verileri karşılaştırıldığında, Bileşen A, iki deneyde tutarlı absorpsiyon spektrumuna sahiptir.A Bileşeninin iki farklı flaş kartuşunda tutarsız tepe şekline sahip olması nedeniyle, normal faz kartuşu ve SAX kartuşunda farklı tutuşa sahip olan A Bileşeninde belirli bir yabancı maddenin bulunduğu tahmin edilmektedir.Bu nedenle, Bileşen A ve bu iki flaş kartuşundaki safsızlık için elüsyon sırası farklıdır, bu da kromatogramlarda tutarsız tepe şekline neden olur.

Şekil 5. Bileşen A'nın tam dalga boyu spektrumu ve normal faz kartuşuyla ayrılan safsızlık.

Şekil 6. Bileşen A'nın tam dalga boyu spektrumu ve SAX kartuşu ile ayrılan safsızlık.

Toplanacak hedef ürün nötr Bileşen A ise saflaştırma görevi, örnek yükleme sonrasında elüsyon için doğrudan SAX kartuşu kullanılarak kolayca tamamlanabilir.Öte yandan, toplanacak hedef ürün asidik Bileşen B ise, yakalama-bırakma yöntemi deney adımlarında yalnızca hafif bir ayarlamayla benimsenebilir: numune SAX kartuşuna ve nötr Bileşen A'ya yüklendiğinde. normal fazlı organik çözücülerle tamamen elüt edildi, mobil fazı %5 asetik asit içeren metanol çözeltisine değiştirin.Mobil fazdaki asetat iyonları, SAX kartuşunun sabit fazındaki dördüncül amin iyon gruplarına bağlanmak için Bileşen B ile rekabet edecek ve böylece hedef ürünü elde etmek için Bileşen B'yi kartuştan ayıracaktır.İyon değiştirme modunda ayrılan numunenin kromatogramı Şekil 7'de gösterilmiştir.

Şekil 7. Bir SAX kartuşunda iyon değişim modunda elüe edilen Bileşen B'nin flaş kromatogramı.

Sonuç olarak, asidik veya nötr numune, farklı saflaştırma stratejileri kullanılarak normal fazlı kartuşla birleştirilmiş SAX kartuşu ile hızlı bir şekilde saflaştırılabilir.Ayrıca, SepaBean™ makinesinin kontrol yazılımında yerleşik olarak bulunan tam dalga boyu tarama özelliğinin yardımıyla, elüt edilen fraksiyonların karakteristik absorpsiyon spektrumu kolayca karşılaştırılıp doğrulanabiliyor, bu da araştırmacıların elüt edilen fraksiyonların bileşimini ve saflığını hızlı bir şekilde belirlemesine ve dolayısıyla iyileştirmelere yardımcı oluyor. iş verimliliği.

Ürün numarası

Sütun Boyutu

Akış hızı

(mL/dak)

Maksimum basınç

(psi/bar)

SW-5001-004-IR

5,9 gr

10-20

400/27,5

SW-5001-012-IR

23 gr

15-30

400/27,5

SW-5001-025-IR

38 gr

15-30

400/27,5

SW-5001-040-IR

55 gr

20-40

400/27,5

SW-5001-080-IR

122 gr

30-60

350/24.0

SW-5001-120-IR

180 gr

40-80

300/20,7

SW-5001-220-IR

340 gr

50-100

300/20,7

SW-5001-330-IR

475 gr

50-100

250/17,2

 

Tablo 2. SepaFlash Bonded Serisi SAX flaş kartuşları.Ambalaj malzemeleri: Ultra saf düzensiz SAX bağlı silika, 40 - 63 μm, 60 Å.

SepaBean™'ın ayrıntılı özellikleri hakkında daha fazla bilgi içinSepaFlash serisi flash kartuşların sipariş bilgileri için lütfen web sitemizi ziyaret edin.


Gönderim zamanı: Kasım-09-2018