Banner ng Balita

Balita

Ang Application ng SepaFlash Strong Anion Exchange Chromatography Columns sa Paglilinis ng Acidic Compounds

Ang Application ng SepaFlash Strong

Rui Huang, Bo Xu
Application R&D Center

Panimula
Ang Ion exchange chromatography (IEC) ay isang chromatographic na pamamaraan na karaniwang ginagamit upang paghiwalayin at linisin ang mga compound na ipinakita sa ionic na anyo sa solusyon.Ayon sa iba't ibang estado ng singil ng mga napalitang ion, ang IEC ay maaaring nahahati sa dalawang uri, ang cation exchange chromatography at anion exchange chromatography.Sa cation exchange chromatography, ang mga acidic na grupo ay nakagapos sa ibabaw ng separation media.Halimbawa, ang sulfonic acid (-SO3H) ay isang karaniwang ginagamit na grupo sa malakas na cation exchange (SCX), na naghihiwalay sa H+ at ang negatibong sisingilin na grupo -SO3- ay maaaring mag-adsorb ng iba pang mga cation sa solusyon.Sa anion exchange chromatography, ang mga alkaline na grupo ay nakagapos sa ibabaw ng separation media.Halimbawa, ang quaternary amine (-NR3OH, kung saan ang R ay hydrocarbon group) ay karaniwang ginagamit sa strong anion exchange (SAX), na naghihiwalay sa OH- at ang positively charged group -N+R3 ay maaaring mag-adsorb ng iba pang mga anion sa solusyon, na nagreresulta sa anion epekto ng palitan.

Sa mga likas na produkto, ang mga flavonoid ay nakakuha ng atensyon ng mga mananaliksik dahil sa kanilang papel sa pag-iwas at paggamot ng mga sakit sa cardiovascular.Dahil ang mga flavonoid molecule ay acidic dahil sa pagkakaroon ng phenolic hydroxyl groups, ang ion exchange chromatography ay isang alternatibong opsyon bilang karagdagan sa conventional normal phase o reversed phase chromatography para sa paghihiwalay at paglilinis ng mga acidic compound na ito.Sa flash chromatography, ang karaniwang ginagamit na separation media para sa ion exchange ay silica gel matrix kung saan ang mga ion exchange group ay nakadikit sa ibabaw nito.Ang pinakakaraniwang ginagamit na mga mode ng pagpapalitan ng ion sa flash chromatography ay SCX (karaniwan ay sulfonic acid group) at SAX (karaniwang quaternary amine group).Sa naunang nai-publish na application note na may pamagat na "The Application of SepaFlash Strong Cation Exchange Chromatography Columns in the Purification of Alkaline Compounds" ng Santai Technologies, ginamit ang mga column ng SCX para sa paglilinis ng mga alkaline compound.Sa post na ito, isang pinaghalong neutral at acidic na mga pamantayan ang ginamit bilang sample upang galugarin ang aplikasyon ng mga SAX column sa paglilinis ng mga acidic compound.

Seksyon ng Eksperimental

Figure 1. Ang diagram ng eskematiko ng nakatigil na yugto na nakatali sa ibabaw ng media ng paghihiwalay ng SAX.

Sa post na ito, ginamit ang isang SAX column na pre-packed na may quaternary amine bonded silica (tulad ng ipinapakita sa Figure 1).Ang isang halo ng Chromone at 2,4-dihydroxybenzoic acid ay ginamit bilang sample na lilinisin (tulad ng ipinapakita sa Figure 2).Ang timpla ay natunaw sa methanol at na-load sa flash cartridge ng isang injector.Ang pang-eksperimentong setup ng flash purification ay nakalista sa Talahanayan 1.

Figure 2. Ang kemikal na istraktura ng dalawang sangkap sa sample mixture.

Instrumento

SepaBean™ machine T

Mga Cartridge

4 g SepaFlash Standard Series flash cartridge (irregular silica, 40 - 63 μm, 60 Å, Order number: S-5101-0004)

4 g SepaFlash Bonded Series SAX flash cartridge (irregular silica, 40 - 63 μm, 60 Å, Order number:SW-5001-004-IR)

Haba ng daluyong

254 nm (detection), 280 nm (monitoring)

Mobile phase

Solvent A: N-hexane

Solvent B: Ethyl acetate

Daloy ng rate

30 mL/min

20 mL/min

Sample loading

20 mg (isang pinaghalong Component A at Component B)

Gradient

Oras (CV)

Solvent B (%)

Oras (CV)

Solvent B (%)

0

0

0

0

1.7

12

14

100

3.7

12

/

/

16

100

/

/

18

100

/

/

Resulta at diskusyon

Una, ang sample mixture ay pinaghiwalay ng isang normal na phase flash cartridge na paunang naka-pack na may regular na silica.Tulad ng ipinapakita sa Figure 3, ang dalawang sangkap sa sample ay na-eluted mula sa cartridge nang isa-isa.Susunod, isang SAX flash cartridge ang ginamit para sa paglilinis ng sample.Tulad ng ipinapakita sa Figure 4, ang acidic na Component B ay ganap na napanatili sa SAX cartridge.Ang neutral na Component A ay unti-unting natanggal mula sa cartridge na may elution ng mobile phase.

Figure 3. Ang flash chromatogram ng sample sa isang regular na normal na phase cartridge.

Figure 4. Ang flash chromatogram ng sample sa isang SAX cartridge.
Paghahambing ng Figure 3 at Figure 4, ang Component A ay may hindi pare-parehong peak na hugis sa dalawang magkaibang flash cartridge.Upang kumpirmahin kung ang elution peak ay tumutugma sa bahagi, maaari naming gamitin ang buong wavelength scanning feature na nakapaloob sa control software ng SepaBean™ machine.Buksan ang pang-eksperimentong data ng dalawang paghihiwalay, i-drag sa linya ng tagapagpahiwatig sa time axis (CV) sa chromatogram hanggang sa pinakamataas na punto at ang pangalawang pinakamataas na punto ng elution peak na tumutugma sa Component A, at ang buong wavelength spectrum ng dalawang ito. Ang mga puntos ay awtomatikong ipapakita sa ibaba ng chromatogram (tulad ng ipinapakita sa Figure 5 at Figure 6).Ang paghahambing ng buong wavelength spectrum data ng dalawang paghihiwalay na ito, ang Component A ay may pare-parehong spectrum ng pagsipsip sa dalawang eksperimento.Para sa kadahilanang ang Component A ay may hindi pare-parehong peak na hugis sa dalawang magkaibang flash cartridge, ito ay ispekulasyon na mayroong tiyak na karumihan sa Component A na may iba't ibang retention sa normal na phase cartridge at SAX cartridge.Samakatuwid, ang eluting sequence ay iba para sa Component A at ang impurity sa dalawang flash cartridge na ito, na nagreresulta sa hindi pare-parehong peak shape sa chromatograms.

Figure 5. Ang buong wavelength spectrum ng Component A at ang karumihan na pinaghihiwalay ng normal na phase cartridge.

Figure 6. Ang buong wavelength spectrum ng Component A at ang impurity na pinaghihiwalay ng SAX cartridge.

Kung ang target na produkto na kokolektahin ay ang neutral na Component A, ang gawain sa paglilinis ay madaling makumpleto sa pamamagitan ng direktang paggamit ng SAX cartridge para sa elution pagkatapos ng sample loading.Sa kabilang banda, kung ang target na produkto na kokolektahin ay ang acidic na Component B, ang paraan ng pag-capture-release ay maaaring gamitin na may kaunting pagsasaayos lamang sa mga pang-eksperimentong hakbang: kapag ang sample ay na-load sa SAX cartridge at ang neutral na Component A ay ganap na na-eluted out gamit ang normal na phase organic solvents, ilipat ang mobile phase sa methanol solution na naglalaman ng 5% acetic acid.Ang mga acetate ions sa mobile phase ay makikipagkumpitensya sa Component B para sa pagbubuklod sa mga quaternary amine ion group sa nakatigil na yugto ng SAX cartridge, at sa gayon ay inilalabas ang Component B mula sa cartridge upang makuha ang target na produkto.Ang chromatogram ng sample na pinaghiwalay sa ion exchange mode ay ipinakita sa Figure 7.

Figure 7. Ang flash chromatogram ng Component B ay na-eluted sa ion exchange mode sa isang SAX cartridge.

Sa konklusyon, ang acidic o neutral na sample ay maaaring mabilis na linisin ng SAX cartridge na sinamahan ng normal na phase cartridge na gumagamit ng iba't ibang mga diskarte sa paglilinis.Higit pa rito, sa tulong ng buong wavelength scanning feature na nakapaloob sa control software ng SepaBean™ machine, ang katangian ng absorption spectrum ng mga eluted fraction ay madaling maikumpara at makumpirma, na tumutulong sa mga mananaliksik na mabilis na matukoy ang komposisyon at kadalisayan ng mga eluted fraction at sa gayon ay mapabuti. kahusayan sa trabaho.

Bilang

Laki ng Column

Daloy ng rate

(mL/min)

Max.Pressure

(psi/bar)

SW-5001-004-IR

5.9 g

10-20

400/27.5

SW-5001-012-IR

23 g

15-30

400/27.5

SW-5001-025-IR

38 g

15-30

400/27.5

SW-5001-040-IR

55 g

20-40

400/27.5

SW-5001-080-IR

122 g

30-60

350/24.0

SW-5001-120-IR

180 g

40-80

300/20.7

SW-5001-220-IR

340 g

50-100

300/20.7

SW-5001-330-IR

475 g

50-100

250/17.2

 

Talahanayan 2. SepaFlash Bonded Series SAX flash cartridges.Mga materyales sa pag-iimpake: Ultra-pure irregular SAX-bonded silica, 40 - 63 μm, 60 Å.

Para sa karagdagang impormasyon sa mga detalyadong detalye ng SepaBean™machine, o ang impormasyon sa pag-order sa mga flash cartridge ng serye ng SepaFlash, mangyaring bisitahin ang aming website.


Oras ng post: Nob-09-2018