Banner de noticias

Novas

A aplicación das columnas de cromatografía de intercambio aniónico forte SepaFlash na purificación de compostos ácidos

A aplicación de SepaFlash Strong

Rui Huang, Bo Xu
Centro de I+D de aplicación

Introdución
A cromatografía de intercambio iónico (IEC) é un método cromatográfico comúnmente usado para separar e purificar os compostos que se presentan en forma iónica en solución.Segundo os diferentes estados de carga dos ións intercambiables, a IEC pódese dividir en dous tipos, cromatografía de intercambio catiónico e cromatografía de intercambio aniónico.Na cromatografía de intercambio catiónico, os grupos ácidos únense á superficie do medio de separación.Por exemplo, o ácido sulfónico (-SO3H) é un grupo de uso común no intercambio catiónico forte (SCX), que disocia H+ e o grupo cargado negativamente -SO3- pode así adsorber outros catións na solución.Na cromatografía de intercambio aniónico, os grupos alcalinos únense á superficie do medio de separación.Por exemplo, a amina cuaternaria (-NR3OH, onde R é o grupo hidrocarburo) adoita usarse no intercambio aniónico forte (SAX), que disocia OH- e o grupo cargado positivamente -N+R3 pode adsorber outros anións na solución, o que resulta en anión. efecto de cambio.

Entre os produtos naturais, os flavonoides chamaron a atención dos investigadores polo seu papel na prevención e tratamento de enfermidades cardiovasculares.Dado que as moléculas de flavonoides son ácidas debido á presenza de grupos hidroxilo fenólicos, a cromatografía de intercambio iónico é unha opción alternativa ademais da cromatografía convencional en fase normal ou en fase inversa para a separación e purificación destes compostos ácidos.Na cromatografía flash, o medio de separación comúnmente usado para o intercambio iónico é a matriz de xel de sílice onde os grupos de intercambio iónico están unidos á súa superficie.Os modos de intercambio iónico máis utilizados na cromatografía flash son SCX (xeralmente grupo ácido sulfónico) e SAX (normalmente grupo amina cuaternario).Na nota de solicitude publicada anteriormente co título "A aplicación de columnas de cromatografía de intercambio catiónico forte de SepaFlash na purificación de compostos alcalinos" de Santai Technologies, empregáronse columnas SCX para a purificación de compostos alcalinos.Neste post, utilizouse unha mestura de patróns neutros e ácidos como mostra para explorar a aplicación das columnas SAX na purificación de compostos ácidos.

Sección Experimental

Figura 1. O diagrama esquemático da fase estacionaria unida á superficie dos medios de separación SAX.

Nesta publicación, utilizouse unha columna SAX preenvasada con sílice unida a aminas cuaternarias (como se mostra na Figura 1).Utilizouse unha mestura de cromona e ácido 2,4-dihidroxibenzoico como mostra a purificar (como se mostra na figura 2).A mestura foi disolta en metanol e cargada no cartucho flash mediante un inxector.A configuración experimental da purificación flash está listada na Táboa 1.

Figura 2. A estrutura química dos dous compoñentes da mestura da mostra.

Instrumento

Máquina SepaBean™ T

Cartuchos

Cartucho de flash SepaFlash Standard Series de 4 g (sílice irregular, 40 - 63 μm, 60 Å, número de pedido: S-5101-0004)

Cartucho flash SAX SepaFlash Bonded Series de 4 g (sílice irregular, 40 - 63 μm, 60 Å, número de pedido: SW-5001-004-IR)

Lonxitude de onda

254 nm (detección), 280 nm (monitorización)

Fase móbil

Disolvente A: N-hexano

Disolvente B: acetato de etilo

Caudal

30 ml/min

20 ml/min

Carga da mostra

20 mg (unha mestura de compoñente A e compoñente B)

Degradado

Tempo (CV)

Disolvente B (%)

Tempo (CV)

Disolvente B (%)

0

0

0

0

1.7

12

14

100

3.7

12

/

/

16

100

/

/

18

100

/

/

Resultados e discusión

En primeiro lugar, a mestura de mostra foi separada por un cartucho flash de fase normal pre-embalado con sílice normal.Como se mostra na Figura 3, os dous compoñentes da mostra eluíronse do cartucho un tras outro.A continuación, utilizouse un cartucho flash SAX para a purificación da mostra.Como se mostra na Figura 4, o compoñente ácido B retivo completamente no cartucho SAX.O compoñente neutro A eluíuse gradualmente do cartucho coa elución da fase móbil.

Figura 3. O cromatograma flash da mostra nun cartucho normal de fase normal.

Figura 4. O cromatograma flash da mostra nun cartucho SAX.
Comparando a figura 3 e a figura 4, o compoñente A ten forma de pico inconsistente nos dous cartuchos flash diferentes.Para confirmar se o pico de elución corresponde ao compoñente, podemos utilizar a función de dixitalización de lonxitude de onda completa que está integrada no software de control da máquina SepaBean™.Abra os datos experimentais das dúas separacións, arrastre ata a liña indicadora no eixe do tempo (CV) no cromatograma ata o punto máis alto e o segundo punto máis alto do pico de elución correspondente ao compoñente A e o espectro completo de lonxitudes de onda destes dous. puntos mostraranse automaticamente debaixo do cromatograma (como se mostra na Figura 5 e Figura 6).Comparando os datos do espectro de lonxitude de onda completo destas dúas separacións, o compoñente A ten un espectro de absorción consistente en dous experimentos.Debido a que o compoñente A ten forma de pico inconsistente en dous cartuchos flash diferentes, especúlase que hai impurezas específicas no compoñente A que ten unha retención diferente no cartucho de fase normal e no cartucho SAX.Polo tanto, a secuencia de elución é diferente para o compoñente A e a impureza destes dous cartuchos flash, resultando unha forma de pico inconsistente nos cromatogramas.

Figura 5. O espectro completo de lonxitudes de onda do compoñente A e a impureza separados polo cartucho de fase normal.

Figura 6. O espectro completo de lonxitudes de onda do compoñente A e a impureza separada polo cartucho SAX.

Se o produto obxectivo a recoller é o compoñente neutro A, a tarefa de purificación pódese completar facilmente utilizando directamente o cartucho SAX para a elución despois da carga da mostra.Por outra banda, se o produto obxectivo a recoller é o compoñente ácido B, a forma de captura-liberación poderíase adoptar con só un lixeiro axuste nos pasos experimentais: cando a mostra se cargaba no cartucho SAX e o compoñente neutro A. foi completamente eluída con disolventes orgánicos de fase normal, cambiar a fase móbil a solución de metanol que contén ácido acético ao 5%.Os ións acetato na fase móbil competirán co compoñente B para unirse aos grupos iónicos amina cuaternario na fase estacionaria do cartucho SAX, eluíndo así o compoñente B do cartucho para obter o produto obxectivo.O cromatograma da mostra separada en modo de intercambio iónico mostrouse na Figura 7.

Figura 7. O cromatograma flash do compoñente B eluído en modo de intercambio iónico nun cartucho SAX.

En conclusión, a mostra ácida ou neutra podería ser purificada rapidamente mediante un cartucho SAX combinado cun cartucho de fase normal utilizando diferentes estratexias de purificación.Ademais, coa axuda da función de dixitalización de lonxitude de onda completa integrada no software de control da máquina SepaBean™, o espectro de absorción característico das fraccións eluídas podería compararse e confirmarse facilmente, axudando aos investigadores a determinar rapidamente a composición e pureza das fraccións eluidas e mellorar así. eficiencia laboral.

Número de elemento

Tamaño da columna

Caudal

(ml/min)

Presión máx

(psi/bar)

SW-5001-004-IR

5,9 g

10-20

400/27.5

SW-5001-012-IR

23 g

15-30

400/27.5

SW-5001-025-IR

38 g

15-30

400/27.5

SW-5001-040-IR

55 g

20-40

400/27.5

SW-5001-080-IR

122 g

30-60

350/24.0

SW-5001-120-IR

180 g

40-80

300/20.7

SW-5001-220-IR

340 g

50-100

300/20.7

SW-5001-330-IR

475 g

50-100

250/17.2

 

Táboa 2. Cartuchos flash SAX SepaFlash Bonded Series.Materiais de embalaxe: sílice irregular ultrapura unida a SAX, 40 - 63 μm, 60 Å.

Para obter máis información sobre as especificacións detalladas de SepaBean™máquina ou a información de pedido dos cartuchos flash da serie SepaFlash, visite o noso sitio web.


Hora de publicación: 09-nov-2018