酸性化合物の精製における SepaFlash 強陰イオン交換クロマトグラフィー カラムの応用

結果と考察

まず、サンプル混合物は、通常のシリカがあらかじめ充填された順相フラッシュカートリッジによって分離されました。図 3 に示すように、サンプル中の 2 つの成分がカートリッジから次々に溶出しました。次に、SAX フラッシュ カートリッジを使用してサンプルを精製しました。図 4 に示すように、酸性成分 B は SAX カートリッジ上に完全に保持されました。中性成分 A は移動相の溶出に伴ってカートリッジから徐々に溶出しました。

図 3. 通常の順相カートリッジ上のサンプルのフラッシュ クロマトグラム。

図 4. SAX カートリッジ上のサンプルのフラッシュ クロマトグラム。
図 3 と図 4 を比較すると、コンポーネント A は 2 つの異なるフラッシュ カートリッジで一貫性のないピーク形状を持っています。溶出ピークが成分に対応しているかどうかを確認するには、SepaBean™ マシンの制御ソフトウェアに組み込まれている全波長スキャン機能を利用できます。2 つの分離の実験データを開き、クロマトグラムの時間軸 (CV) 上のインジケーター ラインに、成分 A に対応する溶出ピークの最高点と 2 番目に高い点、およびこれら 2 つの全波長スペクトルまでドラッグします。ポイントはクロマトグラムの下に自動的に表示されます (図 5 および図 6 を参照)。これら 2 つの分離の全波長スペクトル データを比較すると、成分 A は 2 つの実験で一貫した吸収スペクトルを示しています。成分 A のピーク形状が 2 つの異なるフラッシュ カートリッジで一貫していないため、順相カートリッジと SAX カートリッジで保持力が異なる成分 A に特定の不純物が含まれていると推測されます。したがって、これら 2 つのフラッシュ カートリッジでは、成分 A と不純物の溶出順序が異なり、その結果、クロマトグラム上のピーク形状が不一致になります。

図 5. 順相カートリッジで分離された成分 A と不純物の全波長スペクトル。

図 6. SAX カートリッジによって分離された成分 A と不純物の全波長スペクトル。

回収対象物が中性成分 A の場合、サンプル導入後、直接 SAX カートリッジを使用して溶出することで簡単に精製作業を完了できます。一方、回収対象の生成物が酸性成分 B の場合、サンプルを SAX カートリッジにロードし、中性成分 A を添加する場合、実験手順をわずかに調整するだけで捕捉・放出方式を採用できます。順相有機溶媒で完全に溶出した後、移動相を 5% 酢酸を含むメタノール溶液に切り替えます。移動相中の酢酸イオンは、SAX カートリッジの固定相上の第 4 級アミンイオン基への結合をめぐって成分 B と競合し、それによってカートリッジから成分 B を溶出させて目的生成物を取得します。イオン交換モードで分離されたサンプルのクロマトグラムを図 7 に示します。

図 7. SAX カートリッジのイオン交換モードで溶出した成分 B のフラッシュ クロマトグラム。

結論として、酸性または中性のサンプルは、さまざまな精製戦略を利用した順相カートリッジと組み合わせた SAX カートリッジによって迅速に精製できます。さらに、SepaBean™ マシンの制御ソフトウェアに組み込まれた全波長スキャン機能の助けを借りて、溶出画分の特徴的な吸収スペクトルを簡単に比較および確認することができ、研究者が溶出画分の組成と純度を迅速に決定するのに役立ち、結果として溶出画分の品質を向上させることができます。作業効率。