Rui Huang ၊ Bo Xu
လျှောက်လွှာ R&D စင်တာ
နိဒါန်း
Ion exchange chromatography (IEC) သည် ဖြေရှင်းချက်ထဲတွင် ionic form ဖြင့်တင်ပြထားသည့် ဒြပ်ပေါင်းများကို ခွဲထုတ်သန့်စင်ရန်အတွက် အသုံးများသော ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ်နည်းလမ်းတစ်ခုဖြစ်သည်။ဖလှယ်နိုင်သော အိုင်းယွန်းများ၏ မတူညီသော အခကြေးငွေ အခြေအနေများအရ IEC ကို အိုင်ယွန်လဲလှယ်နိုင်သော ခရိုမာတိုပညာနှင့် အိုင်းယွန်းလဲလှယ် ခရိုမာတိုဂရမ်ဟူ၍ နှစ်မျိုးခွဲခြားနိုင်သည်။cation exchange chromatography တွင်၊ အက်စစ်ဓာတ်အုပ်စုများသည် ခွဲထွက်မီဒီယာ၏မျက်နှာပြင်နှင့် ချိတ်ဆက်ထားသည်။ဥပမာအားဖြင့်၊ sulfonic acid (-SO3H) သည် H+ နှင့် အနှုတ်လက္ခဏာဆောင်သောအုပ်စု -SO3- ကို ခွဲထုတ်သည့် အားကြီးသော cation exchange (SCX) တွင် အသုံးများသော အုပ်စုဖြစ်ပြီး၊ ထို့ကြောင့် အဖြေထဲတွင် အခြား cations များကို စုပ်ယူနိုင်သည်။anion exchange chromatography တွင်၊ အယ်ကာလိုင်းအုပ်စုများကို ခွဲထွက်မီဒီယာ၏မျက်နှာပြင်နှင့် ချိတ်ဆက်ထားသည်။ဥပမာအားဖြင့်၊ quaternary amine (-NR3OH၊ R သည် ဟိုက်ဒရိုကာဗွန်အုပ်စုရှိရာ) ကို OH- နှင့် အပြုသဘောဆောင်သော အားသွင်းအုပ်စု-N+R3 တို့ကို ခွဲထုတ်သည့် ပြင်းထန်သော anion exchange (SAX) တွင် အများအားဖြင့် အသုံးပြုလေ့ရှိပြီး အဖြေထဲတွင် anion များကို စုပ်ယူနိုင်ပြီး anion ဖြစ်ပေါ်စေသည်။ လဲလှယ်အကျိုးသက်ရောက်မှု။
သဘာဝထုတ်ကုန်များထဲတွင် flavonoids သည် နှလုံးသွေးကြောဆိုင်ရာရောဂါများကို ကာကွယ်ကုသရာတွင် ၎င်းတို့၏အခန်းကဏ္ဍကြောင့် သုတေသီများ၏ အာရုံစိုက်မှုကို ဆွဲဆောင်ခဲ့သည်။ဖလေဗိုနွိုက်မော်လီကျူးများသည် ဖီနိုလစ်ဟိုက်ဒရော့ဇင်အုပ်စုများပါ၀င်ခြင်းကြောင့် အက်စစ်ဓာတ်ဖြစ်သောကြောင့်၊ အိုင်းယွန်းလဲလှယ်ခရိုမာတီဂရမ်သည် သာမာန်သာမန်အဆင့် သို့မဟုတ် အက်စစ်ဓာတ်များကို ခွဲထုတ်ရန်နှင့် သန့်စင်ရန်အတွက် သမရိုးကျသာမန်အဆင့် သို့မဟုတ် ပြောင်းပြန်အဆင့် ခရိုမာတီဂရိုက်အပြင် အခြားရွေးချယ်စရာတစ်ခုဖြစ်သည်။flash chromatography တွင်၊ အိုင်းယွန်းလဲလှယ်မှုအတွက် အသုံးများသော ခွဲထွက်မီဒီယာသည် စီလီကာဂျယ်မက်ထရစ်ဖြစ်ပြီး အိုင်းယွန်းလဲလှယ်သည့်အုပ်စုများကို ၎င်း၏မျက်နှာပြင်နှင့် ချိတ်ဆက်ထားသည်။flash chromatography တွင် အသုံးအများဆုံး အိုင်းယွန်းလဲလှယ်မုဒ်များမှာ SCX (များသောအားဖြင့် sulfonic acid အုပ်စု) နှင့် SAX (များသောအားဖြင့် quaternary amine အုပ်စု) ဖြစ်သည်။Santai Technologies မှ "အယ်လ်ကာလီဒြပ်ပေါင်းများကို သန့်စင်ခြင်းတွင် SepaFlash Strong Cation Exchange Chromatography ကော်လံများ လျှောက်လွှာတင်ခြင်း" ခေါင်းစဉ်ပါ အက်ပလီကေးရှင်းမှတ်စုတွင် SCX ကော်လံများကို အယ်ကာလိုင်းဒြပ်ပေါင်းများ သန့်စင်ရန်အတွက် အသုံးပြုခဲ့သည်။ဤပို့စ်တွင်၊ အက်ဆစ်ဓာတ်များကို သန့်စင်ရာတွင် SAX ကော်လံများအသုံးပြုမှုကို လေ့လာရန် ဘက်မလိုက်နှင့် အက်ဆစ်စံချိန်စံညွှန်းများ ရောစပ်ထားသော နမူနာအဖြစ် အသုံးပြုခဲ့သည်။
သမ္ပဒါကဏ္ဍ
ပုံ 1. SAX ခွဲထွက်မီဒီယာ၏ မျက်နှာပြင်နှင့် ချိတ်ဆက်ထားသော stationary phase ၏ schematic diagram။
ဤပို့စ်တွင်၊ quaternary amine bonded silica ဖြင့်ထုပ်ပိုးထားသော SAX ကော်လံကို (ပုံ 1 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း) ကိုအသုံးပြုခဲ့သည်။Chromone နှင့် 2.4-dihydroxybenzoic acid တို့ကို သန့်စင်ရန် နမူနာအဖြစ် အသုံးပြုခဲ့သည် (ပုံ 2 တွင် ပြထားသည့်အတိုင်း)။အဆိုပါအရောအနှောကို methanol တွင်ပျော်ဝင်ခဲ့ပြီး injector ဖြင့် flash ယမ်းတောင့်ပေါ်သို့တင်ခဲ့သည်။ဖလက်ရှ်သန့်စင်ခြင်း၏ စမ်းသပ်တပ်ဆင်မှုကို ဇယား 1 တွင် ဖော်ပြထားပါသည်။
ပုံ 2။ နမူနာအရောအနှောရှိ အစိတ်အပိုင်းနှစ်ခု၏ ဓာတုဖွဲ့စည်းပုံ။
| တူရိယာ | SepaBean™ စက် T | |||||
| ပုံးများ | 4 g SepaFlash Standard Series ဖလက်ရှ်ကျည်တောင့် (ပုံမှန်မဟုတ်သော ဆီလီကာ၊ 40 - 63 μm၊ 60 Å၊ မှာယူမှုနံပါတ်- S-5101-0004) | 4 g SepaFlash Bonded Series SAX ဖလက်ရှ် ကျည်တောင့် (ပုံမှန်မဟုတ်သော ဆီလီကာ၊ 40 - 63 μm၊ 60 Å၊ မှာယူမှုနံပါတ်：SW-5001-004-IR) | ||||
| လှိုင်းအလျား | 254 nm (ထောက်လှမ်းမှု)၊ 280 nm (စောင့်ကြည့်ရေး)၊ | |||||
| မိုဘိုင်းအဆင့် | Solvent A: N-hexane | |||||
| Solvent B: Ethyl acetate | ||||||
| စီးဆင်းနှုန်း | 30 mL/မိနစ် | 20 mL/မိနစ် | ||||
| နမူနာ တင်ခြင်း။ | 20 mg (Component A နှင့် Component B ရောနှောခြင်း) | |||||
| အရောင်ခြယ်ခြင်း။ | အချိန် (CV) | Solvent B (%) | အချိန် (CV) | Solvent B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| ၁.၇ | 12 | 14 | ၁၀၀ | |||
| ၃.၇ | 12 | / | / | |||
| 16 | ၁၀၀ | / | / | |||
| 18 | ၁၀၀ | / | / | |||
ရလဒ်နှင့်ဆွေးနွေးခြင်း
ပထမဦးစွာ၊ နမူနာအရောအနှောကို ပုံမှန်ဆီလီကာဖြင့် ထုပ်ပိုးထားသော ပုံမှန်အဆင့် flash ယမ်းတောင့်ဖြင့် ပိုင်းခြားထားသည်။ပုံ 3 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း နမူနာရှိ အစိတ်အပိုင်းနှစ်ခုကို ယမ်းတောင့်မှ တစ်ခုပြီးတစ်ခု ဖယ်ထုတ်ထားသည်။ထို့နောက် နမူနာကို သန့်စင်ရန်အတွက် SAX flash ယမ်းတောင့်ကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ပုံ 4 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း၊ အက်ဆစ်ဓာတ်ပါဝင်သည့် B သည် SAX ကျည်တောင့်တွင် လုံး၀ထိန်းသိမ်းထားသည်။မိုဘိုင်းအဆင့်၏ elution ဖြင့် ကြားနေအစိတ်အပိုင်း A သည် ယမ်းတောင့်မှ တဖြည်းဖြည်း ဖယ်ထုတ်ခံရသည်။
ပုံ 3။ ပုံမှန်သာမန်အဆင့်ကျည်တောင့်တစ်ခုရှိ နမူနာ၏ flash chromatogram။
ပုံ 4။ SAX ကျည်တောင့်တစ်ခုရှိ နမူနာ၏ flash chromatogram
ပုံ 3 နှင့် ပုံ 4 ကို နှိုင်းယှဉ်ပါက၊ အစိတ်အပိုင်း A သည် မတူညီသော flash ကျည်တောင့်နှစ်ခုတွင် တသမတ်တည်း အမြင့်ဆုံးပုံသဏ္ဍာန်ရှိသည်။elution peak သည် အစိတ်အပိုင်းနှင့် သက်ဆိုင်ခြင်းရှိမရှိ အတည်ပြုရန်၊ SepaBean™ စက်၏ ထိန်းချုပ်ဆော့ဖ်ဝဲတွင် တည်ဆောက်ထားသည့် လှိုင်းအလျားစကင်ဖတ်စစ်ဆေးခြင်းအင်္ဂါရပ်ကို ကျွန်ုပ်တို့ အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။ပိုင်းခြားမှုနှစ်ခု၏ စမ်းသပ်ဒေတာကိုဖွင့်ပါ၊ chromatogram ရှိ အချိန်ဝင်ရိုး (CV) ပေါ်ရှိ ညွှန်ပြသည့်မျဉ်းသို့ ဆွဲယူကာ အမြင့်ဆုံးအမှတ်နှင့် အစိတ်အပိုင်း A နှင့် သက်ဆိုင်သည့် elution peak ၏ ဒုတိယအမြင့်ဆုံးအမှတ်၊ နှင့် ဤနှစ်ခု၏ လှိုင်းအလျားအပြည့်အစုံ spectrum အမှတ်များကို chromatogram အောက်တွင် အလိုအလျောက်ပြသပါမည် (ပုံ 5 နှင့် ပုံ 6 တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း)။ဤခွဲထွက်မှုနှစ်ခု၏ လှိုင်းအလျားအပြည့် ရောင်စဉ်ဒေတာကို နှိုင်းယှဉ်ကာ၊ အစိတ်အပိုင်း A သည် စမ်းသပ်မှုနှစ်ခုတွင် တစ်သမတ်တည်း စုပ်ယူမှု spectrum ရှိသည်။Component A ၏ မတူညီသော flash cartridges နှစ်ခုတွင် တသမတ်တည်း အထွတ်အထိပ်ပုံသဏ္ဍာန်မရှိသောကြောင့်၊ ပုံမှန်အဆင့်ကျည်တောင့်နှင့် SAX ကျည်တောင့်များတွင် ကွဲပြားသောထိန်းသိမ်းမှုရှိသော Component A တွင် တိကျသောညစ်ညမ်းမှုများ ရှိနေသည်ဟု ခန့်မှန်းရသည်။ထို့ကြောင့်၊ Component A အတွက် eluting sequence သည် ကွဲပြားပြီး ဤ flash cartridges နှစ်ခုရှိ အညစ်အကြေးများသည် chromatograms ပေါ်ရှိ အထွတ်အထိပ်ပုံသဏ္ဍာန်ကို ဖြစ်ပေါ်စေပါသည်။
ပုံ 5. Component A ၏ လှိုင်းအလျား အပြည့်နှင့် ပုံမှန်အဆင့် ယမ်းတောင့်ဖြင့် ပိုင်းခြားထားသော အညစ်အကြေး။
ပုံ 6. Component A ၏ လှိုင်းအလျားအပြည့်နှင့် SAX ကျည်တောင့်ဖြင့် ပိုင်းခြားထားသော အညစ်အကြေး။
စုဆောင်းရမည့်ပစ်မှတ်ထုတ်ကုန်သည် ကြားနေအစိတ်အပိုင်း A ဖြစ်ပါက၊ နမူနာတင်ပြီးနောက် elution အတွက် SAX ကျည်တောင့်ကို အသုံးပြု၍ သန့်စင်ခြင်းလုပ်ငန်းကို အလွယ်တကူ ပြီးမြောက်နိုင်သည်။အခြားတစ်ဖက်တွင်၊ စုဆောင်းရမည့်ပစ်မှတ်ထုတ်ကုန်သည် အက်စစ်ဓာတ်ပါဝင်သည့် B ဖြစ်ပါက၊ စမ်းသပ်ဆဲအဆင့်များတွင် အနည်းငယ်ချိန်ညှိမှုဖြင့် ဖမ်းယူထုတ်လွှတ်သည့်ပုံစံကို လက်ခံနိုင်သည်- နမူနာကို SAX ကျည်တောင့်နှင့် ကြားနေအစိတ်အပိုင်း A တွင် တင်သောအခါ၊ သာမာန်အဆင့် အော်ဂဲနစ်ပျော်ဝင်ပစ္စည်းများဖြင့် လုံးဝဖယ်ထုတ်လိုက်ပြီး၊ 5% acetic acid ပါရှိသော မိုဘိုင်းအဆင့်ကို မီသနောရည်သို့ ပြောင်းပါ။မိုဘိုင်းအဆင့်ရှိ acetate အိုင်းယွန်းများသည် SAX ကျည်တောင့်တွင် quaternary amine ion အုပ်စုများနှင့် ချိတ်ဆက်ရန်အတွက် Component B နှင့် ယှဉ်ပြိုင်မည်ဖြစ်ပြီး၊ ထို့ကြောင့် ပစ်မှတ်ထုတ်ကုန်ကိုရယူရန် Component B ကို ယမ်းတောင့်မှဖယ်ထုတ်မည်ဖြစ်သည်။အိုင်းယွန်းလဲလှယ်မုဒ်တွင် ပိုင်းခြားထားသော နမူနာ၏ ခရိုမာတိုဂရမ်ကို ပုံ 7 တွင် ပြထားသည်။
ပုံ 7။ SAX ကျည်တောင့်တစ်ခုပေါ်ရှိ အိုင်းယွန်းလဲလှယ်မုဒ်တွင် ပါဝင်သော အစိတ်အပိုင်း B ၏ flash chromatogram
နိဂုံးချုပ်အားဖြင့်၊ ကွဲပြားခြားနားသော သန့်စင်မှုနည်းဗျူဟာများကို အသုံးပြု၍ ပုံမှန်အဆင့်ကျည်တောင့်နှင့် ပေါင်းစပ်ထားသော အက်စစ်ဓာတ် သို့မဟုတ် ကြားနေနမူနာကို လျင်မြန်စွာ သန့်စင်နိုင်မည်ဖြစ်သည်။ထို့အပြင်၊ SepaBean™ စက်၏ထိန်းချုပ်ဆော့ဖ်ဝဲတွင်တည်ဆောက်ထားသောလှိုင်းအလျားစကင်န်ဖတ်ခြင်းအင်္ဂါရပ်၏အကူအညီဖြင့်၊ eluted အပိုင်းအစများ၏ဝိသေသစုပ်ယူမှုရောင်စဉ်ကိုအလွယ်တကူနှိုင်းယှဉ်အတည်ပြုနိုင်ကာ သုတေသီများသည် eluted အပိုင်းများ၏ဖွဲ့စည်းမှုနှင့်သန့်ရှင်းမှုကိုအမြန်ဆုံးဖြတ်ရန်ကူညီပေးပြီးတိုးတက်ကောင်းမွန်လာစေသည်။ အလုပ်ထိရောက်မှု။
| ပစ္စည်းနံပါတ် | ကော်လံအရွယ်အစား | စီးဆင်းနှုန်း (မီလီဂရမ်/မိနစ်) | Max.Pressure (psi/bar) |
| SW-5001-004-IR | 5.9 ဂရမ် | ၁၀-၂၀ | 400/27.5 |
| SW-5001-012-IR | ၂၃ ဂရမ် | ၁၅-၃၀ | 400/27.5 |
| SW-5001-025-IR | ၃၈ ဂရမ် | ၁၅-၃၀ | 400/27.5 |
| SW-5001-040-IR | 55 ဂရမ် | ၂၀-၄၀ | 400/27.5 |
| SW-5001-080-IR | 122 ဂရမ် | ၃၀-၆၀ | 350/24.0 |
| SW-5001-120-IR | 180 ဂရမ် | ၄၀-၈၀ | ၃၀၀/၂၀.၇ |
| SW-5001-220-IR | ၃၄၀ ဂရမ် | ၅၀-၁၀၀ | ၃၀၀/၂၀.၇ |
| SW-5001-330-IR | 475 ဂရမ် | ၅၀-၁၀၀ | 250/17.2
|
ဇယား 2. SepaFlash Bonded Series SAX ဖလက်ရှ် ကျည်တောင့်များ။ထုပ်ပိုးပစ္စည်းများ- အလွန်သန့်စင်သော ပုံမမှန်သော SAX-bonded ဆီလီကာ၊ 40 - 63 μm၊ 60 Å။
SepaBean™ ၏အသေးစိတ်အချက်အလက်များအတွက် နောက်ထပ်အချက်အလက်များအတွက်စက် သို့မဟုတ် SepaFlash စီးရီး flash ကျည်တောင့်များ မှာယူခြင်းဆိုင်ရာ အချက်အလက်ကို ကျွန်ုပ်တို့၏ ဝဘ်ဆိုဒ်သို့ ဝင်ရောက်ကြည့်ရှုပါ။
စာတိုက်အချိန်- Nov-09-2018