A aplicação das colunas de cromatografia de troca aniônica forte SepaFlash na purificação de compostos ácidos

Resultados e discussão

Primeiramente, a mistura da amostra foi separada por um cartucho flash de fase normal pré-embalado com sílica regular.Conforme mostrado na Figura 3, os dois componentes da amostra foram eluídos do cartucho um após o outro.Em seguida, um cartucho flash SAX foi utilizado para a purificação da amostra.Como mostra a Figura 4, o Componente ácido B ficou completamente retido no cartucho SAX.O Componente A neutro foi gradualmente eluído do cartucho com a eluição da fase móvel.

Figura 3. O cromatograma flash da amostra em um cartucho regular de fase normal.

Figura 4. O cromatograma flash da amostra em um cartucho SAX.
Comparando a Figura 3 e a Figura 4, o Componente A tem formato de pico inconsistente nos dois cartuchos flash diferentes.Para confirmar se o pico de eluição corresponde ao componente, podemos utilizar o recurso de varredura de comprimento de onda completo que está integrado no software de controle da máquina SepaBean™.Abra os dados experimentais das duas separações, arraste para a linha indicadora no eixo do tempo (CV) no cromatograma até o ponto mais alto e o segundo ponto mais alto do pico de eluição correspondente ao Componente A, e o espectro completo de comprimento de onda destes dois os pontos serão mostrados automaticamente abaixo do cromatograma (conforme mostrado na Figura 5 e Figura 6).Comparando os dados do espectro de comprimento de onda completo destas duas separações, o Componente A tem espectro de absorção consistente em dois experimentos.Como o Componente A tem formato de pico inconsistente em dois cartuchos flash diferentes, especula-se que haja impureza específica no Componente A que tem retenção diferente no cartucho de fase normal e no cartucho SAX.Portanto, a sequência de eluição é diferente para o Componente A e a impureza nestes dois cartuchos flash, resultando em formato de pico inconsistente nos cromatogramas.

Figura 5. O espectro completo de comprimento de onda do Componente A e a impureza separada pelo cartucho de fase normal.

Figura 6. O espectro completo de comprimento de onda do Componente A e a impureza separada pelo cartucho SAX.

Se o produto alvo a ser coletado for o Componente A neutro, a tarefa de purificação pode ser facilmente concluída usando diretamente o cartucho SAX para eluição após o carregamento da amostra.Por outro lado, se o produto alvo a ser coletado for o Componente B ácido, a forma de captura-liberação poderia ser adotada com apenas um leve ajuste nas etapas experimentais: quando a amostra foi carregada no cartucho SAX e o Componente A neutro foi completamente eluído com solventes orgânicos de fase normal, troque a fase móvel para solução de metanol contendo ácido acético a 5%.Os íons acetato na fase móvel competirão com o Componente B pela ligação aos grupos de íons amina quaternários na fase estacionária do cartucho SAX, eluindo assim o Componente B do cartucho para obter o produto alvo.O cromatograma da amostra separada em modo de troca iônica foi mostrado na Figura 7.

Figura 7. O cromatograma flash do Componente B eluído no modo de troca iônica em um cartucho SAX.

Em conclusão, a amostra ácida ou neutra pode ser rapidamente purificada pelo cartucho SAX combinado com o cartucho de fase normal utilizando diferentes estratégias de purificação.Além disso, com a ajuda do recurso de varredura de comprimento de onda completo incorporado no software de controle da máquina SepaBean™, o espectro de absorção característico das frações eluídas pode ser facilmente comparado e confirmado, ajudando os pesquisadores a determinar rapidamente a composição e a pureza das frações eluídas e, assim, melhorando eficiência do trabalho.