Spanduk Berita

Berita

Penerapan Kolom Kromatografi Penukar Anion Kuat SepaFlash dalam Pemurnian Senyawa Asam

Penerapan SepaFlash Kuat

Rui Huang, Bo Xu
Pusat Litbang Aplikasi

Perkenalan
Kromatografi penukar ion (IEC) adalah metode kromatografi yang biasa digunakan untuk memisahkan dan memurnikan senyawa yang disajikan dalam bentuk ionik dalam larutan.Menurut perbedaan muatan ion yang dapat ditukar, IEC dapat dibagi menjadi dua jenis, kromatografi penukar kation dan kromatografi penukar anion.Dalam kromatografi penukar kation, gugus asam diikatkan pada permukaan media pemisahan.Misalnya, asam sulfonat (-SO3H) adalah gugus yang umum digunakan dalam pertukaran kation kuat (SCX), yang memisahkan H+ dan gugus bermuatan negatif -SO3- dapat mengadsorpsi kation lain dalam larutan.Dalam kromatografi penukar anion, gugus basa terikat pada permukaan media pemisahan.Misalnya, amina kuaterner (-NR3OH, dengan R adalah gugus hidrokarbon) biasanya digunakan dalam penukar anion kuat (SAX), yang akan memisahkan OH- dan gugus bermuatan positif -N+R3 dapat menyerap anion lain dalam larutan, sehingga menghasilkan anion. efek pertukaran.

Di antara produk alami, flavonoid telah menarik perhatian para peneliti karena perannya dalam pencegahan dan pengobatan penyakit kardiovaskular.Karena molekul flavonoid bersifat asam karena adanya gugus hidroksil fenolik, kromatografi penukar ion merupakan pilihan alternatif selain kromatografi fase normal konvensional atau fase terbalik untuk pemisahan dan pemurnian senyawa asam ini.Dalam kromatografi flash, media pemisahan yang umum digunakan untuk pertukaran ion adalah matriks silika gel dimana gugus penukar ion terikat pada permukaannya.Mode pertukaran ion yang paling umum digunakan dalam kromatografi flash adalah SCX (biasanya gugus asam sulfonat) dan SAX (biasanya gugus amina kuaterner).Dalam catatan aplikasi yang diterbitkan sebelumnya dengan judul “Penerapan Kolom Kromatografi Pertukaran Kation Kuat SepaFlash dalam Pemurnian Senyawa Alkalin” oleh Santai Technologies, kolom SCX digunakan untuk pemurnian senyawa basa.Pada postingan kali ini, campuran standar netral dan asam digunakan sebagai sampel untuk mengeksplorasi penerapan kolom SAX dalam pemurnian senyawa asam.

Bagian eksperimental

Gambar 1. Diagram skema fasa diam yang terikat pada permukaan media pemisahan SAX.

Dalam posting ini, kolom SAX yang dikemas sebelumnya dengan silika terikat amina kuaterner digunakan (seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1).Campuran Chromone dan asam 2,4-dihidroksibenzoat digunakan sebagai sampel yang akan dimurnikan (seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2).Campuran tersebut dilarutkan dalam metanol dan dimasukkan ke dalam kartrid flash dengan injektor.Pengaturan eksperimental pemurnian flash tercantum pada Tabel 1.

Gambar 2. Struktur kimia kedua komponen dalam campuran sampel.

Instrumen

Mesin SepaBean™ T

Kartrid

Kartrid flash Seri Standar SepaFlash 4 g (silika tidak beraturan, 40 - 63 μm, 60 Å, Nomor pesanan: S-5101-0004)

4 g Kartrid flash SAX Seri Berikat SepaFlash (silika tidak beraturan, 40 - 63 μm, 60 Å, Nomor pesanan:SW-5001-004-IR)

Panjang gelombang

254 nm (deteksi), 280 nm (pemantauan)

Fase seluler

Pelarut A: N-heksana

Pelarut B: Etil asetat

Laju aliran

30 mL/menit

20 mL/menit

Pemuatan sampel

20 mg (campuran Komponen A dan Komponen B)

Gradien

Waktu (CV)

Pelarut B (%)

Waktu (CV)

Pelarut B (%)

0

0

0

0

1.7

12

14

100

3.7

12

/

/

16

100

/

/

18

100

/

/

Hasil dan Diskusi

Pertama, campuran sampel dipisahkan dengan kartrid flash fase normal yang sudah dikemas sebelumnya dengan silika biasa.Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3, dua komponen dalam sampel dielusi dari kartrid satu demi satu.Selanjutnya, kartrid flash SAX digunakan untuk pemurnian sampel.Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4, Komponen B yang bersifat asam tertahan seluruhnya pada kartrid SAX.Komponen A netral secara bertahap dielusi dari kartrid dengan elusi fase gerak.

Gambar 3. Kromatogram flash sampel pada kartrid fase normal biasa.

Gambar 4. Kromatogram flash sampel pada kartrid SAX.
Membandingkan Gambar 3 dan Gambar 4, Komponen A memiliki bentuk puncak yang tidak konsisten pada dua kartrid flash yang berbeda.Untuk memastikan apakah puncak elusi sesuai dengan komponen, kita dapat memanfaatkan fitur pemindaian panjang gelombang penuh yang dibangun dalam perangkat lunak kontrol mesin SepaBean™.Buka data eksperimen kedua pemisahan tersebut, seret ke garis indikator pada sumbu waktu (CV) dalam kromatogram ke titik tertinggi dan titik tertinggi kedua dari puncak elusi yang sesuai dengan Komponen A, dan spektrum panjang gelombang penuh dari keduanya. titik-titik akan secara otomatis ditampilkan di bawah kromatogram (seperti yang ditunjukkan pada Gambar 5 dan Gambar 6).Membandingkan data spektrum panjang gelombang penuh dari kedua pemisahan ini, Komponen A memiliki spektrum serapan yang konsisten dalam dua percobaan.Karena Komponen A memiliki bentuk puncak yang tidak konsisten pada dua kartrid flash yang berbeda, diperkirakan terdapat pengotor spesifik pada Komponen A yang memiliki retensi berbeda pada kartrid fase normal dan kartrid SAX.Oleh karena itu, urutan elusi berbeda untuk Komponen A dan pengotor pada kedua kartrid flash ini, sehingga menghasilkan bentuk puncak yang tidak konsisten pada kromatogram.

Gambar 5. Spektrum panjang gelombang penuh Komponen A dan pengotor dipisahkan oleh kartrid fase normal.

Gambar 6. Spektrum panjang gelombang penuh Komponen A dan pengotornya dipisahkan dengan kartrid SAX.

Jika produk target yang akan dikumpulkan adalah Komponen A netral, tugas pemurnian dapat diselesaikan dengan mudah dengan langsung menggunakan kartrid SAX untuk elusi setelah pemuatan sampel.Di sisi lain, jika produk target yang akan dikumpulkan adalah Komponen B yang bersifat asam, cara penangkapan-pelepasan dapat diterapkan hanya dengan sedikit penyesuaian dalam langkah-langkah percobaan: ketika sampel dimasukkan ke dalam kartrid SAX dan Komponen A yang netral. telah dielusi seluruhnya dengan pelarut organik fase normal, alihkan fase gerak ke larutan metanol yang mengandung asam asetat 5%.Ion asetat dalam fase gerak akan bersaing dengan Komponen B untuk berikatan dengan gugus ion amina kuaterner pada fase diam kartrid SAX, sehingga mengelusi Komponen B dari kartrid untuk mendapatkan produk target.Kromatogram sampel yang dipisahkan dalam mode pertukaran ion ditunjukkan pada Gambar 7.

Gambar 7. Kromatogram flash Komponen B dielusi dalam mode pertukaran ion pada kartrid SAX.

Kesimpulannya, sampel asam atau netral dapat dimurnikan dengan cepat menggunakan kartrid SAX yang dikombinasikan dengan kartrid fase normal menggunakan strategi pemurnian yang berbeda.Lebih jauh lagi, dengan bantuan fitur pemindaian panjang gelombang penuh yang terpasang pada perangkat lunak kontrol mesin SepaBean™, spektrum serapan karakteristik dari fraksi yang dielusi dapat dengan mudah dibandingkan dan dikonfirmasi, membantu peneliti dengan cepat menentukan komposisi dan kemurnian fraksi yang dielusi dan dengan demikian meningkatkan efisiensi kerja.

Nomor barang

Ukuran Kolom

Laju Aliran

(mL/menit)

Tekanan Maks

(psi/bar)

SW-5001-004-IR

5,9 gram

10-20

400/27.5

SW-5001-012-IR

23 gram

15-30

400/27.5

SW-5001-025-IR

38 gram

15-30

400/27.5

SW-5001-040-IR

55 gram

20-40

400/27.5

SW-5001-080-IR

122 gram

30-60

350/24.0

SW-5001-120-IR

180 gram

40-80

300/20.7

SW-5001-220-IR

340 gram

50-100

300/20.7

SW-5001-330-IR

475 gram

50-100

250/17.2

 

Tabel 2. Kartrid flash SAX Seri Berikat SepaFlash.Bahan pengepakan: Silika berikat SAX tak beraturan ultra-murni, 40 - 63 μm, 60 Å.

Untuk informasi lebih lanjut mengenai spesifikasi rinci SepaBean™mesin, atau informasi pemesanan flash cartridge seri SepaFlash, silakan kunjungi website kami.


Waktu posting: 09-November-2018