Rui Huang, Bo Xu
Canolfan Ymchwil a Datblygu Cymwysiadau
Rhagymadrodd
Mae cromatograffaeth cyfnewid ïon (IEC) yn ddull cromatograffig a ddefnyddir yn gyffredin i wahanu a phuro'r cyfansoddion a gyflwynir ar ffurf ïonig mewn hydoddiant.Yn ôl gwahanol daleithiau ïonau cyfnewidiadwy, gellir rhannu IEC yn ddau fath, cromatograffaeth cyfnewid cation a chromatograffeg cyfnewid anion.Mewn cromatograffaeth cyfnewid cation, mae grwpiau asidig yn cael eu bondio i wyneb y cyfryngau gwahanu.Er enghraifft, mae asid sylffonig (-SO3H) yn grŵp a ddefnyddir yn gyffredin mewn cyfnewid catïon cryf (SCX), sy'n daduno H+ a gall y grŵp â gwefr negatif -SO3- felly arsugno catïonau eraill yn yr hydoddiant.Mewn cromatograffaeth cyfnewid anion, mae grwpiau alcalïaidd wedi'u bondio i wyneb y cyfryngau gwahanu.Er enghraifft, mae amin cwaternaidd (-NR3OH, lle mae R yn grŵp hydrocarbon) fel arfer yn cael ei ddefnyddio mewn cyfnewid anionau cryf (SAX), sy'n daduno OH- a gall y grŵp â gwefr bositif -N + R3 arsugno anionau eraill yn yr hydoddiant, gan arwain at anion. effaith cyfnewid.
Ymhlith cynhyrchion naturiol, mae flavonoidau wedi denu sylw ymchwilwyr oherwydd eu rôl wrth atal a thrin clefydau cardiofasgwlaidd.Gan fod y moleciwlau flavonoid yn asidig oherwydd presenoldeb grwpiau hydroxyl ffenolig, mae cromatograffaeth cyfnewid ïon yn opsiwn amgen yn ogystal â chromatograffaeth cyfnod arferol confensiynol neu gyfnod gwrthdroi ar gyfer gwahanu a phuro'r cyfansoddion asidig hyn.Mewn cromatograffaeth fflach, y cyfrwng gwahanu a ddefnyddir yn gyffredin ar gyfer cyfnewid ïon yw matrics gel silica lle mae grwpiau cyfnewid ïon wedi'u bondio i'w wyneb.Y dulliau cyfnewid ïon a ddefnyddir amlaf mewn cromatograffaeth fflach yw SCX (grŵp asid sulfonig fel arfer) a SAX (grŵp amin cwaternaidd fel arfer).Yn y nodyn cais a gyhoeddwyd yn flaenorol gyda'r teitl “Cymhwyso Colofnau Cromatograffeg Cyfnewid Cation Cryf SepaFlash wrth Buro Cyfansoddion Alcalïaidd” gan Santai Technologies, defnyddiwyd colofnau SCX ar gyfer puro cyfansoddion alcalïaidd.Yn y swydd hon, defnyddiwyd cymysgedd o safonau niwtral ac asidig fel y sampl i archwilio cymhwyso colofnau SAX wrth buro cyfansoddion asidig.
Adran Arbrofol
Ffigur 1. Y diagram sgematig o'r cyfnod llonydd wedi'i fondio i wyneb cyfrwng gwahanu SAX.
Yn y swydd hon, defnyddiwyd colofn SAX wedi'i rhag-bacio â silica wedi'i fondio amin cwaternaidd (fel y dangosir yn Ffigur 1).Defnyddiwyd cymysgedd o Chromone ac asid 2,4-dihydroxybenzoic fel y sampl i'w buro (fel y dangosir yn Ffigur 2).Cafodd y cymysgedd ei hydoddi mewn methanol a'i lwytho ar y cetris fflach gan chwistrellydd.Mae gosodiad arbrofol y puro fflach wedi'i restru yn Nhabl 1.
Ffigur 2. Strwythur cemegol y ddwy gydran yn y cymysgedd sampl.
| Offeryn | peiriant SepaBean™ T | |||||
| Cetris | 4 g cetris fflach Cyfres Safonol SepaFlash (silica afreolaidd, 40 - 63 μm, 60 Å, Rhif archeb: S-5101-0004) | Cetris fflach SAX Cyfres Bonded SepaFlash 4g (silica afreolaidd, 40 - 63 μm, 60 Å, Rhif archeb: SW-5001-004-IR) | ||||
| Tonfedd | 254 nm (canfod), 280 nm (monitro) | |||||
| Cyfnod symudol | Hydoddydd A: N-hecsan | |||||
| Hydoddydd B: asetad ethyl | ||||||
| Cyfradd llif | 30 ml/munud | 20 ml/munud | ||||
| Llwytho sampl | 20 mg (cymysgedd o Gydran A ac Cydran B) | |||||
| graddiant | Amser (CV) | Hydoddydd B (%) | Amser (CV) | Hydoddydd B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Canlyniadau a Thrafodaeth
Yn gyntaf, gwahanwyd y cymysgedd sampl gan cetris fflach cyfnod arferol wedi'i rag-bacio â silica rheolaidd.Fel y dangosir yn Ffigur 3, cafodd y ddwy gydran yn y sampl eu hosgoi o'r cetris un ar ôl y llall.Nesaf, defnyddiwyd cetris fflach SAX ar gyfer puro'r sampl.Fel y dangosir yn Ffigur 4, cadwyd y Cydran asidig B yn gyfan gwbl ar y cetris SAX.Cafodd Cydran A niwtral ei hepgor yn raddol o'r cetris wrth i'r cyfnod symudol ddod i ben.
Ffigur 3. Cromatogram fflach y sampl ar cetris cyfnod arferol arferol.
Ffigur 4. Cromatogram fflach y sampl ar getrisen SAX.
O gymharu Ffigur 3 a Ffigur 4, mae gan y Cydran A siâp brig anghyson ar y ddau cetris fflach gwahanol.I gadarnhau a yw'r brig elution yn cyfateb i'r gydran, gallwn ddefnyddio'r nodwedd sganio tonfedd lawn sydd wedi'i chynnwys yn meddalwedd rheoli peiriant SepaBean™.Agorwch ddata arbrofol y ddau wahaniad, llusgwch i'r llinell ddangosydd ar yr echelin amser (CV) yn y cromatogram i'r pwynt uchaf ac ail bwynt uchaf y brig elution sy'n cyfateb i'r Cydran A, a sbectrwm tonfedd llawn y ddau hyn bydd pwyntiau'n cael eu dangos yn awtomatig o dan y cromatogram (fel y dangosir yn Ffigur 5 a Ffigur 6).Wrth gymharu data sbectrwm tonfedd llawn y ddau wahaniad hyn, mae gan Gydran A sbectrwm amsugno cyson mewn dau arbrawf.Oherwydd bod gan Gydran A siâp brig anghyson ar ddau cetris fflach gwahanol, mae'n dyfalu bod yna amhuredd penodol yn y Cydran A sydd â chadw gwahanol ar y cetris cyfnod arferol a'r cetris SAX.Felly, mae'r dilyniant eluting yn wahanol ar gyfer y Cydran A a'r amhuredd ar y ddau cetris fflach hyn, gan arwain at siâp brig anghyson ar y cromatogramau.
Ffigur 5. Sbectrwm tonfedd lawn y Cydran A a'r amhuredd wedi'i wahanu gan cetris cyfnod arferol.
Ffigur 6. Sbectrwm tonfedd lawn y Cydran A a'r amhuredd wedi'i wahanu gan cetris SAX.
Os mai'r cynnyrch targed i'w gasglu yw'r Cydran A niwtral, mae'n hawdd cwblhau'r dasg buro trwy ddefnyddio'r cetris SAX yn uniongyrchol ar gyfer elution ar ôl llwytho sampl.Ar y llaw arall, os mai'r Cydran B asidig yw'r cynnyrch targed i'w gasglu, gellid mabwysiadu'r dull dal-rhyddhau gyda dim ond ychydig o addasiad yn y camau arbrofol: pan lwythwyd y sampl ar y cetris SAX a'r Cydran niwtral A. wedi'i alltudio'n llwyr â thoddyddion organig cyfnod arferol, newid y cyfnod symudol i hydoddiant methanol sy'n cynnwys asid asetig 5%.Bydd yr ïonau asetad yn y cyfnod symudol yn cystadlu â'r Cydran B i'w rhwymo i'r grwpiau ïon amin cwaternaidd ar gyfnod llonydd cetris SAX, a thrwy hynny dynnu Cydran B o'r cetris i gael y cynnyrch targed.Dangoswyd cromatogram y sampl a wahanwyd yn y modd cyfnewid ïon yn Ffigur 7.
Ffigur 7. Cromatogram fflach y Cydran B wedi'i guddio yn y modd cyfnewid ïon ar getrisen SAX.
I gloi, gellid puro sampl asidig neu niwtral yn gyflym gyda chetris SAX ynghyd â chetris cyfnod arferol gan ddefnyddio gwahanol strategaethau puro.Ar ben hynny, gyda chymorth nodwedd sganio tonfedd lawn sydd wedi'i chynnwys yn y feddalwedd rheoli peiriant SepaBean™, gellid cymharu a chadarnhau sbectrwm amsugno nodweddiadol y ffracsiynau eliwt yn hawdd, gan helpu ymchwilwyr i benderfynu'n gyflym ar gyfansoddiad a phurdeb y ffracsiynau eliwiedig a thrwy hynny wella. effeithlonrwydd gwaith.
| Rhif yr Eitem | Maint Colofn | Cyfradd Llif (mL/munud) | Max.Pwysau (psi/bar) |
| SW-5001-004-IR | 5.9 g | 10-20 | 400/27.5 |
| SW-5001-012-IR | 23 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-025-IR | 38 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-040-IR | 55 g | 20-40 | 400/27.5 |
| SW-5001-080-IR | 122 g | 30-60 | 350/24.0 |
| SW-5001-120-IR | 180 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5001-220-IR | 340 g | 50-100 | 300/20.7 |
| SW-5001-330-IR | 475 g | 50-100 | 250/17.2
|
Tabl 2. SepaFlash Bonded Cyfres SAX cetris fflach.Deunyddiau pacio: Ultra-pur pur afreolaidd SAX-bondio silica, 40 - 63 μm, 60 Å.
I gael rhagor o wybodaeth am fanylebau manwl SepaBean™peiriant, neu'r wybodaeth archebu ar cetris fflach cyfres SepaFlash, ewch i'n gwefan.
Amser postio: Nov-09-2018