Honcheng Vang, Bo Xu
Ilova R & D markazi
Kirish
Statsionar davr va mobil bosqichning nisbiy siyosatiga ko'ra, suyuq xromatografiya normal xromatografiya (NPC) va tiklangan plalat xromatografiyasiga (RPC) bo'lish mumkin. RPC uchun mobil fazaning qutblari statsionar bosqichdan kuchliroqdir. RPC yuqori samaradorlik, to'g'ri tartibli va saqlashni tozalash mexanizmi tufayli suyuq xromatografiya ajratish rejimlarida eng keng qo'llaniladi. Shunday qilib, RPC turli xil qutblar, uglevidentlar, yog ', nuklein kislotalari, peptys, oqsillar, pottys, gelli kislotalar, gelli kislotalar, shu jumladan C8, C4, Ushbu obro'li funktsional guruhlar orasida Fenil, Cyano, Amino va boshqalar. Eng ko'p ishlatiladigan C18. Hisob-kitoblarga ko'ra, RPCning 80% dan ortig'i C18 taqlidiy bosqichidan foydalanmoqda. Shunday qilib, C1ROMATICEST CHART har bir laboratoriya uchun universal ustunga aylandi.
Garchi C18 ustuni juda keng qo'llanuvlarda ishlatilishi mumkin bo'lsa-da, juda kam yoki yuqori gidofil, oddiy C18 ustunlari bunday namunalarni poklashda odatlanib qolishi mumkin. RPCda, odatda qo'llaniladigan holatlar ularni poezdlar bo'yicha buyurtma qilish mumkin: suv <metanol <atsetonitre <etanol <tetraidrodofuran <itopropanol. Ushbu namunalar (kuchli qutb yoki yuqori gidrofiliya) uchun juda yaxshi ushlab turish uchun, suvli tizim sifatida suvning katta qismi foydalanish kerak. Biroq, Sof suv tizimidan foydalanganda, C18 ustunidagi uzun uglerod zanjiri suvdan qochish va bir-biriga aralashishga yoki hatto hech qanday ushlab qolishning ketma-ket pasayishiga olib keladi. Ushbu hodisa "hidrofob fazasi qulash" deb nomlanadi (1-rasmning chap qismida ko'rsatilganidek). Bu vaziyat o'zgaruvchan bo'lsa-da, metanol yoki atsetonitr kabi organik erituvchilar bilan yuviladi, bu hali ham ustunga zarar etkazishi mumkin. Shuning uchun bu vaziyatning oldini olish kerak.
1-rasm. Oddiy C18 ustunida silika jelining sxematik diagrammasi (chapda) va C18aq Ustuni (o'ngda).
Yuqorida aytib o'tilgan muammolarni hal qilish uchun xromatografik qadoqlash materiallari ishlab chiqaruvchilar texnik yaxshilanishga erishdilar. Ushbu yaxshilanishlardan biri Sillia Gelning yuqori gelining yuzasini (1-rasmda ko'rsatilganidek) singan Sillia matritsasi yuzasida ba'zi o'zgarishlar kiritish, silika jel yanadagi gelning yuzasini yaratish. Shunday qilib, kr18 zanjiri juda suvli sharoitlarda to'liq suvli sharoitlarda cho'zilishi va gidrofob fazasi qulashi mumkin. Ushbu o'zgartirilgan C18 ustunlari "C18" ustunlari, ya'ni juda suvlinlash va 100% suvli tizimga toqat qilishlari mumkin. C18Q ustunlari kuchli qutb birikmalarini, shu jumladan organik kislotalarni, peptidlar, nuklemosidlar va suvda eriydigan vitaminlarni ajratishda keng qo'llanilmoqda.
Normallashtirish namuna sotib olishni keyingi o'qishni engillashtirish uchun namuna sotib olishni osonlashtiradigan namunaviy hal qiluvchilarni tozalash uchun C18Q ustunlarining odatiy qo'llanilishlaridan biridir. Ushbu lavozimda kuchli qutbli ko'krak qafasi namuna sifatida ishlatilgan va C18Q ustunida tozalangan. Namunaviy hal qiluvchi bufer eritmasidan organik hal qiluvchi bilan almashtirildi, shuning uchun aylanuvchi aylantirish va ish vaqtini tejash va ish vaqtini tejashga yordam beradi. Bundan tashqari, namunaning tozaligi namunada ba'zi aralashmalar olib tashlash bilan yaxshilandi.
Eksperimental bo'lim
2-rasm. Namunaning kimyoviy tuzilishi.
Brilliant ko'k FCF ushbu xabarda namuna sifatida ishlatilgan. Xumlamning pozitsiyasi 86% va namunaning kimyoviy tuzilishi 2-rasmda ko'rsatilgan. Nah2po4 bufer eritmasida 300 mg kukunli ko'krak qafasi 1 m Nah2po4 bufer eritmasida eritilgan va mutlaqo aniq echim bo'ladi. Keyin namunaviy eritma injektor muallifi tomonidan Fleshal-ga yuborildi. Fleshifatsiyaning eksperimental tuzilishi 1-jadvalda keltirilgan.
| Asbob | Sepabodiye ™ mashinasi2 | |||
| Patron | 12 g sepaflash c18 RP Flash kartriumi (Sperik kremnitasi, 20 - 45 mkm, 100 Å, buyurtma raqami: SW-5222-012-SP) | 12 g sepaflash C18oq RP Litragri (Sprical kremniy, 20 - 45 mkm, 100 Å, buyurtma raqami: SW-5222-012-SP (AK))) | ||
| To'lqin uzunligi | 254 nm | |||
| Mobil faza | Solvent a: suv Solvent B: metanol | |||
| Oqim darajasi | 30 ml / min | |||
| Namunaviy yuklash | 300 mg (86% tozali yorqin ko'k fcf) | |||
| Gradient | Vaqt (rezerv) | Hal qiluvchi b (%) | Vaqt (rezerv) | Hal qiluvchi b (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Natijalar va muhokama
Seepaflash C18aq RP RP Litrage Namuna qurish va tozalash uchun ishlatilgan. Bo'li gradient ko'chish boshlanishida, u yoki 10 ta ustunning (rezervlari) uchun ko'chib o'tish va yugurish boshlanganida, qaysi toza suv ishlatilgan. 3-rasmda ko'rsatilganidek, sof suvni mobil bosqich sifatida ishlatganda, namuna Flash kartrijida saqlanib qoldi. Keyin mobil davrdagi metanol to'g'ridan-to'g'ri 100% ga o'sdi va gradient 7,5 rezyani tashkil etdi. Namuna 11,5 dan 13,5 rezyumeni nazarda tutilgan. To'plangan fraktsiyalarda namuna yechimi Metanolga Nah2po4 bufer echimidan almashtirildi. Yuqori suvli eritma bilan taqqoslaganda metanol quyidagi tadqiqotlarga yordam beradigan keyingi bosqichda aylanishni bug'lash orqali olib tashlash ancha osonroq edi.
3-rasm. C18oq kartrijidagi namunaning chiqish xromatogrammasi.
C18Q kartridjining ushlab turish holatini va kuchli qutb namunalari uchun oddiy C18 kartriji, parallel taqqoslash testi amalga oshirildi. Sepaflash C18 RP Flash kartriji ishlatilgan va 4-rasmda flesh-xromatogrammalar 4-rasmda ko'rsatilgan. Doimiy C18 lostridjlari uchun suv toqati 90% ni tashkil qiladi. Shuning uchun boshlang'ich gradient 90% suvda 10% metanolga o'rnatildi. 4-rasmda ko'rsatilgandek, yuqori suvli nisbati tufayli gidrofob fazasi tufayli, namunada oddiy C18 kartrijida ushlab turilgan va mobil fazada bevosita tarqalgan. Natijada, tanazzulni o'stirish yoki tozalash vositasining ishlashi tugallanmaydi.
4-rasm. Oddiy C18 kartrijida namunaning flesh xromatogrammasi.
Chiziqli gradient bilan taqqoslaganda, bosqich gradientidan foydalanish quyidagi afzalliklarga ega:
1
2. Maqsadli mahsulot keskin kasrlar hajmini kamaytiradi va shu bilan quyidagi aylanuvchi aylanalarning hajmini pasaytiradi va shu bilan quyidagi aylanish vaqtini ta'minlaydi.
3
Xulosa qilib, pozitsiya yoki yuqori grofil yoki yuqori hidrofilik, sepaflash c18oq RP RP RP RP RP Literges tezkor va samarali echimini taklif qilishi uchun.
Seepaflash haqida Serice C18 RP Literges
Santay texnologiyasidan (2-jadvalda ko'rsatilganidek, 2-jadvalda ko'rsatilganidek) Sepaflash C18aq RP Litridjlari mavjud.
| Element raqami | Ustun hajmi | Oqim darajasi (ml / min) | Maks.pressure (PSI / bar) |
| SW-5222-004-SP (AK) | 5.4 g | 5-15 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-012-SP (AK) | 20 g | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-025-SP (AK) | 33 g | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-522-0040-SP (AK) | 48 g | 15-30 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-080-SP (AK) | 105 g | 25-50 | 350 / 24.0 |
| SW-5222-120-SP (AK) | 155 g | 30-60 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-220-SP (AK) | 300 g | 40-80 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-330-SP (AK) | 420 g | 40-80 | 250 / 17.2 |
2-jadval. Sepaflash C18aq RP RP Literges.
Qadoqlash materiallari: Yuqori samaradorlik skrital C18 (AQ) - 20 - 45 mkm, 100 - 45 mkm, 100 Å.
logy (2-jadvalda ko'rsatilganidek).
O'tish vaqti: avgust-27-2018