Хончэн Ван, Бо Шү
Хэрэглээний R&D төв
Оршил
Хөдөлгөөнгүй ба хөдөлгөөнт фазын харьцангуй туйлшралын дагуу шингэн хроматографийг ердийн фазын хроматографи (NPC) ба урвуу фазын хроматографи (RPC) гэж хувааж болно.RPC-ийн хувьд хөдөлгөөнт фазын туйлшрал нь суурин фазынхаас илүү хүчтэй байдаг.RPC нь өндөр үр ашигтай, сайн нягтаршилтай, тодорхой хадгалах механизмын ачаар шингэн хроматографийн ялгах горимд хамгийн өргөн хэрэглэгддэг болсон.Тиймээс RPC нь алкалоид, нүүрс ус, өөхний хүчил, стероид, нуклейн хүчил, амин хүчил, пептид, уураг гэх мэт туйлтай болон туйл бус нэгдлүүдийг ялгах, цэвэршүүлэхэд тохиромжтой. RPC-д хамгийн түгээмэл хэрэглэгддэг суурин үе шат юм. C18, C8, C4, фенил, циано, амино гэх мэт янз бүрийн функциональ бүлгүүдтэй холбогдсон цахиур гель матриц. Эдгээр холбогдсон функциональ бүлгүүдийн дотроос хамгийн өргөн хэрэглэгддэг нь C18 юм.Одоо RPC-ийн 80 гаруй хувь нь C18 холболттой фазыг ашиглаж байна гэж тооцоолж байна.Тиймээс C18 хроматографийн багана нь лаборатори бүрт байх ёстой бүх нийтийн багана болсон.
Хэдийгээр C18 багана нь маш өргөн хүрээний хэрэглээнд ашиглагдаж болох боловч маш туйлширсан эсвэл өндөр гидрофиль шинж чанартай зарим дээжийн хувьд ердийн C18 баганыг ийм дээжийг цэвэршүүлэхэд ашиглахад асуудал гардаг.RPC-д түгээмэл хэрэглэгддэг уусмалын уусгагчийг туйлшралын дагуу нь захиалж болно: ус < метанол < ацетонитрил < этанол < тетрахидрофуран < изопропанол.Эдгээр дээжийг (хүчтэй туйлширсан эсвэл өндөр гидрофиль) багананд сайн хадгалахын тулд хөдөлгөөнт фаз болгон усан системийг их хэмжээгээр ашиглах шаардлагатай.Гэсэн хэдий ч цэвэр усны системийг (цэвэр ус эсвэл цэвэр давсны уусмалыг оруулаад) хөдөлгөөнт фаз болгон ашиглах үед C18 баганын хөдөлгөөнгүй фазын урт нүүрстөрөгчийн гинж нь уснаас зайлсхийж, бие биетэйгээ холилдох хандлагатай байдаг тул усны урсгалыг агшин зуур бууруулдаг. баганын хадгалах чадвар эсвэл бүр хадгалах чадваргүй.Энэ үзэгдлийг "гидрофобик фазын уналт" гэж нэрлэдэг (Зураг 1-ийн зүүн талд үзүүлсэн шиг).Хэдийгээр баганыг метанол эсвэл ацетонитрил гэх мэт органик уусгагчаар угаах үед энэ нөхцөл байдал эргэж болох боловч энэ нь баганад гэмтэл учруулж болзошгүй юм.Тиймээс ийм нөхцөл байдал үүсэхээс урьдчилан сэргийлэх шаардлагатай.
Зураг 1. Энгийн C18 багана (зүүн) болон C18AQ багана (баруун) дахь цахиур гель гадаргуу дээрх холбогдсон фазуудын бүдүүвч диаграмм.
Дээр дурдсан асуудлуудыг шийдвэрлэхийн тулд хроматографийн савлагааны материал үйлдвэрлэгчид техникийн сайжруулалт хийсэн.Эдгээр сайжруулалтын нэг нь цахиурын матрицын гадаргуу дээр зарим өөрчлөлтүүдийг хийж, тухайлбал, гидрофилик циано бүлгүүдийг (Зураг 1-ийн баруун талд үзүүлсэн шиг) оруулснаар цахиурын гелийн гадаргууг илүү гидрофиль болгох явдал юм.Тиймээс цахиурын гадаргуу дээрх C18 гинжийг өндөр усан нөхцөлд бүрэн сунгаж, гидрофобик фазын нуралтаас зайлсхийх боломжтой.Эдгээр өөрчилсөн C18 баганыг усан C18 багана, тухайлбал C18AQ баганууд гэж нэрлэдэг бөгөөд тэдгээр нь маш их усан уусмалын нөхцөлд зориулагдсан бөгөөд 100% усан системийг тэсвэрлэх чадвартай.C18AQ багана нь органик хүчил, пептид, нуклеозид, усанд уусдаг витамин зэрэг хүчтэй туйлын нэгдлүүдийг ялгах, цэвэршүүлэхэд өргөн хэрэглэгддэг.
Давсгүйжүүлэх нь дээжийг цэвэрлэхэд C18AQ баганын ердийн хэрэглээний нэг бөгөөд дараагийн судалгаанд дээжийг хэрэглэхэд хялбар болгох үүднээс дээжийн уусгагч дахь давс эсвэл буферийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг зайлуулдаг.Энэ нийтлэлд хүчтэй туйлшрал бүхий Brilliant Blue FCF-ийг дээж болгон ашиглаж, C18AQ баганад цэвэршүүлсэн болно.Дээжний уусгагчийг буфер уусмалын органик уусгагчаар сольсон нь дараах эргэлтийн ууршилтыг хөнгөвчлөхийн зэрэгцээ уусгагч болон ажиллах хугацааг хэмнэсэн.Цаашилбал дээж дэх зарим хольцыг арилгаснаар дээжийн цэвэршилт сайжирсан.
Туршилтын хэсэг
Зураг 2. Дээжийн химийн бүтэц.
Brilliant Blue FCF-ийг энэ нийтлэлд дээж болгон ашигласан.Түүхий дээжийн цэвэршилт 86% байсан ба дээжийн химийн бүтцийг Зураг 2-т үзүүлэв. Дээжний уусмал бэлтгэхийн тулд Brilliant Blue FCF-ийн 300 мг нунтаг түүхий хатуу бодисыг 1 М NaH2PO4 буферийн уусмалд уусгаад сайтар сэгсэрнэ. бүрэн тодорхой шийдэл.Дараа нь дээжийн уусмалыг инжектороор флаш баганад тарьсан.Флэш цэвэршүүлэх туршилтын тохиргоог 1-р хүснэгтэд үзүүлэв.
| Багаж хэрэгсэл | SepaBean™ машин2 | |||
| Хайрцагнууд | 12 г SepaFlash C18 RP флаш хайрцаг (бөмбөрцөг хэлбэрийн цахиур, 20 - 45 мкм, 100 Å, захиалгын дугаар: SW-5222-012-SP) | 12 гр SepaFlash C18AQ RP флаш хайрцаг (бөмбөрцөг цахиур, 20 - 45 мкм, 100 Å, захиалгын дугаар: SW-5222-012-SP(AQ))） | ||
| Долгионы урт | 254 нм | |||
| Хөдөлгөөнт үе шат | Уусгагч А: Ус Б уусгагч: Метанол | |||
| Урсгалын хурд | 30 мл/мин | |||
| Дээж ачаалах | 300 мг (86% цэвэршилттэй Бриллиант Цэнхэр FCF) | |||
| Градиент | Цаг (CV) | Б уусгагч (%) | Цаг (CV) | Б уусгагч (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Үр дүн ба хэлэлцүүлэг
Дээжийг давсгүйжүүлэх, цэвэршүүлэхэд SepaFlash C18AQ RP флаш хайрцаг ашигласан.Алхам градиентийг ашигласан бөгөөд үүнд цэвэр усыг 10 баганын эзэлхүүнээр (CV) шингээх үед хөдөлгөөнт фаз болгон ашигласан.Зураг 3-т үзүүлснээр цэвэр усыг хөдөлгөөнт фаз болгон ашиглах үед дээжийг флаш хайрцагт бүрэн хадгалсан.Дараа нь хөдөлгөөнт фаз дахь метанолыг шууд 100% хүртэл нэмэгдүүлж, градиентийг 7.5 CV-д хадгалсан.Дээжийг 11.5-аас 13.5 CV хүртэл ялгасан.Цуглуулсан фракцуудад дээжийн уусмалыг NaH2PO4 буферийн уусмалаас метанол болгон сольсон.Өндөр усан уусмалтай харьцуулахад метанолыг дараагийн шатанд эргүүлэх ууршилтаар зайлуулах нь илүү хялбар байсан бөгөөд энэ нь дараах судалгааг хөнгөвчилдөг.
Зураг 3. C18AQ хайрцаг дээрх дээжийн флэш хроматограмм.
Хүчтэй туйлшралтай дээжийн C18AQ хайрцаг ба ердийн C18 хайрцагны хадгалалтын байдлыг харьцуулахын тулд зэрэгцээ харьцуулах туршилтыг хийсэн.SepaFlash C18 RP флаш хайрцаг ашигласан бөгөөд дээжийн флаш хроматограммыг Зураг 4-т үзүүлэв. Энгийн C18 хайрцагны хувьд хамгийн их хүлцэх усан фазын харьцаа 90% орчим байна.Тиймээс эхлэх градиентийг 90% усан дахь 10% метанолоор тогтоосон.Зураг 4-т үзүүлсэнчлэн өндөр усны харьцаанаас үүдэлтэй С18 гинжний гидрофобик фазын задралын улмаас дээж нь ердийн C18 хайрцагт бараг үлдэж, хөдөлгөөнт фазаар шууд ялгарсан.Үүний үр дүнд дээжийг давсгүйжүүлэх эсвэл цэвэршүүлэх ажиллагааг дуусгаж чадахгүй.
Зураг 4. Энгийн C18 хайрцаг дээрх дээжийн флэш хроматограмм.
Шугаман градиенттай харьцуулахад алхам градиент ашиглах нь дараахь давуу талуудтай.
1. Уусгагчийн хэрэглээ болон дээжийг цэвэршүүлэх хугацаа багасна.
2. Зорилтот бүтээгдэхүүн нь хурц оргилд хүрдэг бөгөөд энэ нь цуглуулсан фракцуудын эзлэхүүнийг багасгаж, улмаар дараах эргэлтийн ууршилтыг хөнгөвчлөхийн зэрэгцээ цаг хугацаа хэмнэдэг.
3. Цуглуулсан бүтээгдэхүүн нь ууршуулахад хялбар метанолд агуулагддаг тул хатаах хугацаа багасдаг.
Эцэст нь хэлэхэд, туйлшрал ихтэй эсвэл өндөр гидрофильтэй дээжийг цэвэршүүлэхийн тулд SepaFlash C18AQ RP флаш хайрцагнууд нь SepaBean™ Machine-ийн бэлдмэлийн флаш хроматографийн системтэй хослуулан хурдан бөгөөд үр дүнтэй шийдлийг санал болгож чадна.
SepaFlash Bonded Series C18 RP флаш хайрцагны тухай
Santai Technology-ээс ялгаатай техникийн үзүүлэлт бүхий SepaFlash C18AQ RP флаш хайрцагнууд байдаг (Хүснэгт 2-т үзүүлэв).
| Зүйлийн дугаар | Баганын хэмжээ | Урсгалын хурд (мл/мин) | Хамгийн их даралт (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 гр | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 гр | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 гр | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 гр | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 гр | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 гр | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 гр | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 гр | 40-80 | 250/17.2 |
Хүснэгт 2. SepaFlash C18AQ RP флаш хайрцагнууд.
Сав баглаа боодлын материал: Өндөр үр ашигтай бөмбөрцөг хэлбэртэй C18(AQ)-холбогдсон цахиур, 20 - 45 мкм, 100 Å.
логи (Хүснэгт 2-т үзүүлсний дагуу).
Шуудангийн цаг: 2018 оны 8-р сарын 27