Hongcheng Wang, Bo Xu
Serlêdan Navenda R&D
Pêşkêş
Li gorî polarîteyên têkildar ên qonaxa rawestayî û qonaxa mobîl, kromatografiya şil dikare li kromatografiya qonaxa normal (NPC) û kromatografiya qonaxa berevajî (RPC) were dabeş kirin.Ji bo RPC, polarîteya qonaxa mobîl ji ya qonaxa bêdeng bihêztir e.RPC ji ber karîgeriya xwe ya bilind, çareseriya baş û mekanîzmaya ragirtina zelal di modên veqetandina kromatografiya şil de bûye ya herî berfireh tê bikar anîn.Ji ber vê yekê RPC ji bo veqetandin û paqijkirina pêkhateyên cihêreng ên polar an ne-polar, di nav de alkaloid, karbohîdartan, asîdên rûn, steroid, asîdên nukleîk, asîdên amînî, peptîd, proteîn, hwd. matrixa silica gel a ku bi komên fonksiyonel ên cihêreng ve girêdayî ye, di nav de C18, C8, C4, fenîl, cyano, amino, hwd.Tê texmîn kirin ku zêdetirî 80% RPC naha qonaxa girêdana C18 bikar tîne.Ji ber vê yekê stûna kromatografiya C18 ji bo her laboratorê bûye stûnek gerdûnî ya pêdivî ye.
Her çend stûna C18 dikare di cûrbecûr serlêdanan de were bikar anîn, lêbelê, ji bo hin nimûneyên ku pir polar an pir hîdrofîlîk in, stûnên birêkûpêk ên C18 dema ku ji bo paqijkirina nimûneyên weha têne bikar anîn dibe ku pirsgirêk hebin.Di RPC de, halên helandinê yên ku bi gelemperî têne bikar anîn li gorî polarîteya wan têne rêz kirin: av < metanol < acetonitrile < etanol < tetrahydrofuran < îsopropanol.Ji bo ku ji van nimûneyan ragirtinek baş li ser stûnê were piştrast kirin (polar xurt an pir hîdrofîl), rêjeya bilind a pergala avî pêdivî ye ku wekî qonaxa mobîl were bikar anîn.Lêbelê, dema ku pergala ava paqij (di nav de ava paqij an jî çareseriya xwê ya paqij) wekî qonaxa mobîl tê bikar anîn, zincîra karbonê ya dirêj a li ser qonaxa stûnê ya stûna C18 meyl dike ku ji avê dûr bikevin û bi hevûdu re tevlihev bibin, û di encamê de kêmbûnek tavilê çêdibe. kapasîteya ragirtinê ya stûnê an jî negirtinê.Ji vê fenomenê re "hilweşîna qonaxa hîdrofobîk" tê gotin (wek ku di beşa çepê ya 1-ê de tê xuyang kirin).Her çend ev rewş vegere dema ku stûn bi halên organîk ên wekî metanol an acetonitrile tê şûştin, dîsa jî ew dikare bibe sedema zirarê li stûnê.Ji ber vê yekê pêwîst e pêşî li vê rewşê bê girtin.
Wêne 1. Diyagrama şematîkî ya qonaxên girêdanê yên li ser rûyê silica gel di stûna birêkûpêk C18 (çep) û stûna C18AQ (rast).
Ji bo çareserkirina pirsgirêkên ku li jor hatine destnîşan kirin, hilberînerên materyalên pakkirinê yên kromatografiyê çêtirkirinên teknîkî kirine.Yek ji van çêtirkirinan çêkirina hin guhertinan e li ser rûyê matrixa silica, wek danasîna komên cyano yên hîdrofîlîk (wek ku di beşa rastê ya Figure 1-ê de tê xuyang kirin), da ku rûyê silica gel bêtir hîdrofîlî bike.Bi vî rengî zincîrên C18 yên li ser rûyê silica di bin şert û mercên pir avî de dikarin bi tevahî werin dirêj kirin û hilweşîna qonaxa hîdrofobîk dikare were dûr kirin.Van stûnên C18-ê yên guhertî jê re stûnên C18 avî têne gotin, ango stûnên C18AQ, ku ji bo şert û mercên şuştina pir avî hatine sêwirandin û dikarin 100% pergala avî tehemul bikin.Stûnên C18AQ bi berfirehî di veqetandin û paqijkirina pêkhateyên polar ên bihêz de, di nav de asîdên organîk, peptîd, nukleosîd û vîtamînên ku di avê de çareser dibin, hatine bikar anîn.
Xalkirin yek ji wan sepanên tîpîk ên stûnên C18AQ e di paqijkirina flashê ya ji bo nimûneyan de, ku xwê an hêmanên tamponê yên di haletê nimûneyê de radike da ku sepana nimûneyê di lêkolînên paşîn de hêsantir bike.Di vê postê de, Brilliant Blue FCF bi polarîteya bihêz wekî nimûne hate bikar anîn û li ser stûna C18AQ hate paqij kirin.Nimûneya rûkalê ji çareseriya tamponê bi helwêstê organîk ve hate guheztin, bi vî rengî evaporasyona zivirî ya jêrîn hêsan dike û hem jî solvan û dema xebitandinê xilas dike.Wekî din, paqijiya nimûneyê bi rakirina hin nepakiyên di nimûneyê de çêtir bû.
Beşa Ezmûnî
Xiflteya 2. Avahiya kîmyewî ya nimûne.
Di vê postê de Brilliant Blue FCF wekî nimûne hate bikar anîn.Paqijiya nimûneya xav %86 bû û avahîya kîmyewî ya nimûneyê di jimar 2 de hat nîşandan. Ji bo amadekirina çareseriya nimûneyê, 300 mg xav a toz a Brilliant Blue FCF di nav çareya tampon a 1 M NaH2PO4 de hate helandin û baş hejand ku bibe. çareseriyek bi tevahî zelal.Dûv re çareseriya nimûneyê ji hêla înjektorê ve di stûna flashê de hate derzî kirin.Sazkirina ceribandinê ya paqijkirina flashê di Tabloya 1-ê de tête navnîş kirin.
| Alet | Makîneya SepaBean™2 | |||
| Cartridges | 12 g SepaFlash C18 RP kartolê (silica gewr, 20 - 45 μm, 100 Å, Hejmara fermanê: SW-5222-012-SP) | 12 g SepaFlash C18AQ Kartolê flashê RP (silica gewr, 20 - 45 μm, 100 Å, Hejmara fermanê: SW-5222-012-SP(AQ)） | ||
| Dirêjahiya pêlê | 254 nm | |||
| Qonaxa mobîl | Solvent A: Av Solvent B: Metanol | |||
| Rêjeya herikînê | 30 ml/min | |||
| Sample loading | 300 mg (Brilliant Blue FCF bi paqijiya 86%) | |||
| Gradient | Dem (CV) | Solvent B (%) | Dem (CV) | Solvent B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Encam û Nîqaş
Ji bo şorkirin û paqijkirina nimûneyê fîşekek SepaFlash C18AQ RP hate bikar anîn.Pîvana gavê hate bikar anîn ku tê de ava paqij wekî qonaxa mobîl di destpêka avêtinê de hate bikar anîn û ji bo 10 cildên stûnê (CV) dimeşe.Wekî ku di Xiflteya 3-ê de tê xuyang kirin, dema ku ava paqij wekî qonaxa mobîl tê bikar anîn, nimûne bi tevahî li ser kartolê flashê hate ragirtin.Dûv re, metanol di qonaxa mobîl de rasterast ji% 100 hate zêdekirin û gradient ji bo 7.5 CV hate domandin.Nimûne ji 11.5 heta 13.5 CV hate derxistin.Di perçeyên berhevkirî de, çareseriya nimûneyê ji çareseriya tampon NaH2PO4 veguherî metanolê.Li gorî çareseriya pir avî, methanol pir hêsantir bû ku di gava paşîn de bi evaporasyona zivirî were rakirin, ku ev lêkolîna jêrîn hêsan dike.
Wêne 3. Kromatograma flash ya nimûneyê ya li ser kartolek C18AQ.
Ji bo berhevdana tevgera ragirtinê ya kartolê C18AQ û kartolê C18 bi rêkûpêk ji bo nimûneyên polarîteya bihêz, ceribandina berhevdana paralel hate kirin.Kartolek flash SepaFlash C18 RP hate bikar anîn û kromatograma flash ji bo nimûneyê di jimar 4 de hate xuyang kirin.Ji ber vê yekê gradient destpêkê li 10% metanol di 90% avê de hate danîn.Wekî ku di Figure 4 de tê xuyang kirin, ji ber hilweşîna qonaxa hîdrofobîk a zincîreyên C18 ku ji ber rêjeya avî ya bilind pêk tê, nimûne bi zorê li ser kartolê birêkûpêk C18 hate girtin û rasterast ji hêla qonaxa mobîl ve hate derxistin.Wekî encamek, operasyona şorkirina nimûne an paqijkirinê nayê qedandin.
Wêne 4. Kromatograma flash ya nimûneyê ya li ser kartolek birêkûpêk C18.
Bi berhevdana bi gradienta xêzikî re, karanîna gradienta gavê xwedî avantajên jêrîn e:
1. Bikaranîna çareserker û dema xebitandinê ji bo paqijkirina nimûneyê kêm dibe.
2. Hilbera mebest di lûtkeyek tûj de dişewite, ku qebareya perçeyên berhevkirî kêm dike û bi vî rengî evaporasyona zivirî ya jêrîn û hem jî teserûfa demê hêsantir dike.
3. Hilbera berhevkirî di metanolê de ye ku bi hêsanî tê hilkirin, bi vî rengî dema hişkbûnê kêm dibe.
Di encamnameyê de, ji bo paqijkirina nimûneya ku bi hêzek polar an pir hîdrofîlîk e, kartolên flash SepaFlash C18AQ RP ku bi pergala kromatografiya flash a amadekar a SepaBean™ Makîneyê re tevdigerin dikarin çareseriyek bilez û bikêr pêşkêşî bikin.
Der barê cerjorên flash SepaFlash Bonded Series C18 RP
Rêzek fîşekên SepaFlash C18AQ RP yên bi taybetmendiyên cihêreng ên ji Teknolojiya Santai (wek ku di Tablo 2 de tê xuyang kirin) hene.
| Hejmara Babetê | Mezinahiya Stûnê | Rêjeya Herikînê (mL/min) | Max.Press (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Table 2. SepaFlash C18AQ RP cerjorên flash.
Materyalên pakkirinê: 20 - 45 μm, 100 Å sferîk C18(AQ)-sîlîka girêdayi-berbiçav.
logy (wek ku di tabloya 2 de tê nîşandan).
Dema şandinê: Aug-27-2018