Hongcheng Wang, Bo Xu
មជ្ឈមណ្ឌលស្រាវជ្រាវ និងអភិវឌ្ឍន៍កម្មវិធី
សេចក្តីផ្តើម
យោងទៅតាមបន្ទាត់រាងប៉ូលដែលទាក់ទងនៃដំណាក់កាលស្ថានី និងដំណាក់កាលចល័ត ក្រូម៉ាតូក្រាមរាវអាចបែងចែកទៅជាក្រូម៉ាតូក្រាមដំណាក់កាលធម្មតា (NPC) និងក្រូម៉ាតូក្រាមដំណាក់កាលបញ្ច្រាស (RPC) ។សម្រាប់ RPC ប៉ូលនៃដំណាក់កាលចល័តគឺខ្លាំងជាងដំណាក់កាលស្ថានី។RPC បានក្លាយជាឧបករណ៍មួយដែលត្រូវបានប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយបំផុតនៅក្នុងរបៀបបំបែកធាតុក្រូម៉ូសូមរាវ ដោយសារប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់ គុណភាពបង្ហាញល្អ និងយន្តការរក្សាភាពច្បាស់លាស់។ដូច្នេះ RPC គឺសមរម្យសម្រាប់ការបំបែក និងបន្សុតនៃសមាសធាតុប៉ូល ឬមិនប៉ូលផ្សេងៗ រួមទាំងអាល់កាឡូអ៊ីត កាបូអ៊ីដ្រាត អាស៊ីតខ្លាញ់ ស្តេរ៉ូអ៊ីត អាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក អាស៊ីតអាមីណូ ភីបទីត ប្រូតេអ៊ីន។ល។ នៅក្នុង RPC ដំណាក់កាលស្ថានីដែលប្រើជាទូទៅបំផុតគឺ ម៉ាទ្រីសស៊ីលីកាជែល ដែលត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងក្រុមមុខងារផ្សេងៗ រួមមាន C18, C8, C4, phenyl, cyano, amino ជាដើម។ ក្នុងចំណោមក្រុមមុខងារដែលជាប់ទាក់ទងគ្នានេះ ត្រូវបានគេប្រើយ៉ាងទូលំទូលាយបំផុតគឺ C18 ។វាត្រូវបានគេប៉ាន់ប្រមាណថាច្រើនជាង 80% នៃ RPC ឥឡូវនេះកំពុងប្រើដំណាក់កាល C18 bonded ។ដូច្នេះជួរឈរ C18 chromatography បានក្លាយជាជួរឈរសកលដែលត្រូវតែមានសម្រាប់គ្រប់បន្ទប់ពិសោធន៍។
ទោះបីជាជួរឈរ C18 អាចត្រូវបានប្រើនៅក្នុងជួរដ៏ធំទូលាយនៃកម្មវិធីក៏ដោយ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ សម្រាប់គំរូមួយចំនួនដែលមានប៉ូល ឬ hydrophilic ខ្លាំង ជួរឈរ C18 ធម្មតាអាចមានបញ្ហានៅពេលត្រូវបានប្រើដើម្បីបន្សុទ្ធគំរូបែបនេះ។នៅក្នុង RPC សារធាតុរំលាយ elution ដែលគេប្រើជាទូទៅអាចបញ្ជាបានតាមបន្ទាត់រាងប៉ូលរបស់វា៖ ទឹក < មេតាណុល < acetonitrile < អេតាណុល < tetrahydrofuran < isopropanol ។ដើម្បីធានាបាននូវការរក្សាបានល្អនៅលើជួរឈរសម្រាប់សំណាកទាំងនេះ (ប៉ូលខ្លាំង ឬ hydrophilic ខ្ពស់) សមាមាត្រខ្ពស់នៃប្រព័ន្ធ aqueous គឺចាំបាច់ដើម្បីប្រើជាដំណាក់កាលចល័ត។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ នៅពេលប្រើប្រព័ន្ធទឹកសុទ្ធ (រួមទាំងទឹកសុទ្ធ ឬដំណោះស្រាយអំបិលសុទ្ធ) ជាដំណាក់កាលចល័ត ខ្សែសង្វាក់កាបូនដ៏វែងនៅលើដំណាក់កាលស្ថានីនៃជួរឈរ C18 មានទំនោរជៀសវាងទឹក និងលាយចូលគ្នា ដែលបណ្តាលឱ្យមានការថយចុះភ្លាមៗនៃ សមត្ថភាពរក្សានៃជួរឈរ ឬសូម្បីតែគ្មានការរក្សាទុក។បាតុភូតនេះត្រូវបានគេហៅថា "ការដួលរលំដំណាក់កាល hydrophobic" (ដូចបង្ហាញក្នុងផ្នែកខាងឆ្វេងនៃរូបភាពទី 1) ។ទោះបីជាស្ថានភាពនេះអាចត្រឡប់វិញបាននៅពេលដែលជួរឈរត្រូវបានលាងសម្អាតជាមួយនឹងសារធាតុរំលាយសរីរាង្គដូចជា មេតាណុល ឬអាសេតូនីទ្រីល ក៏ដោយ ក៏វានៅតែអាចបណ្តាលឱ្យខូចខាតដល់ជួរឈរ។ដូច្នេះហើយត្រូវការពារកុំឱ្យស្ថានភាពនេះកើតឡើង។
រូបភាពទី 1. ដ្យាក្រាមគំនូសតាងនៃដំណាក់កាលផ្សារភ្ជាប់នៅលើផ្ទៃនៃស៊ីលីកាជែលនៅក្នុងជួរឈរ C18 ធម្មតា (ឆ្វេង) និងជួរឈរ C18AQ (ស្តាំ) ។
ដើម្បីដោះស្រាយបញ្ហាដែលបានរៀបរាប់ខាងលើ ក្រុមហ៊ុនផលិតសម្ភារៈវេចខ្ចប់ chromatographic បានធ្វើការកែលម្អបច្ចេកទេស។ការកែលម្អមួយក្នុងចំណោមការកែលម្អទាំងនេះគឺការកែប្រែមួយចំនួនលើផ្ទៃនៃម៉ាទ្រីសស៊ីលីកា ដូចជាការណែនាំនៃក្រុម cyano hydrophilic (ដូចបង្ហាញក្នុងផ្នែកខាងស្តាំនៃរូបភាពទី 1) ដើម្បីធ្វើឱ្យផ្ទៃនៃស៊ីលីកាជែលកាន់តែ hydrophilic ។ដូច្នេះខ្សែសង្វាក់ C18 នៅលើផ្ទៃស៊ីលីកាអាចត្រូវបានពង្រីកយ៉ាងពេញលេញនៅក្រោមលក្ខខណ្ឌដែលមានទឹកខ្លាំង ហើយការដួលរលំដំណាក់កាល hydrophobic អាចត្រូវបានជៀសវាង។ជួរឈរ C18 ដែលបានកែប្រែទាំងនេះត្រូវបានគេហៅថា aqueous C18 columns ពោលគឺ ជួរឈរ C18AQ ដែលត្រូវបានរចនាឡើងសម្រាប់លក្ខខណ្ឌនៃការបំភាយទឹកខ្លាំង និងអាចទ្រាំទ្រនឹងប្រព័ន្ធ aqueous 100%។ជួរឈរ C18AQ ត្រូវបានគេអនុវត្តយ៉ាងទូលំទូលាយនៅក្នុងការបំបែក និងការបន្សុតនៃសមាសធាតុប៉ូលដ៏រឹងមាំ រួមទាំងអាស៊ីតសរីរាង្គ peptides nucleosides និងវីតាមីនរលាយក្នុងទឹក។
Desalting គឺជាកម្មវិធីធម្មតាមួយនៃជួរឈរ C18AQ ក្នុងការបន្សុតពន្លឺសម្រាប់សំណាក ដែលយកសមាសធាតុអំបិល ឬសតិបណ្ដោះអាសន្ននៅក្នុងសារធាតុរំលាយគំរូ ដើម្បីជួយសម្រួលដល់ការអនុវត្តគំរូក្នុងការសិក្សាជាបន្តបន្ទាប់។នៅក្នុងការប្រកាសនេះ Brilliant Blue FCF ដែលមានបន្ទាត់រាងប៉ូលខ្លាំងត្រូវបានគេប្រើជាគំរូ និងបានបន្សុតនៅលើជួរឈរ C18AQ ។សារធាតុរំលាយគំរូត្រូវបានជំនួសដោយសារធាតុរំលាយសរីរាង្គពីដំណោះស្រាយសតិបណ្ដោះអាសន្ន ដូច្នេះវាជួយសម្រួលដល់ការរំហួត rotary ខាងក្រោម ក៏ដូចជាការសន្សំសារធាតុរំលាយ និងពេលវេលាប្រតិបត្តិការ។លើសពីនេះ ភាពបរិសុទ្ធនៃសំណាកគំរូត្រូវបានកែលម្អដោយការយកចេញនូវភាពមិនបរិសុទ្ធមួយចំនួននៅក្នុងគំរូ។
ផ្នែកពិសោធន៍
រូបភាពទី 2. រចនាសម្ព័ន្ធគីមីនៃគំរូ។
Brilliant Blue FCF ត្រូវបានប្រើជាគំរូនៅក្នុងការប្រកាសនេះ។ភាពបរិសុទ្ធនៃសំណាកឆៅគឺ 86% ហើយរចនាសម្ព័ន្ធគីមីនៃសំណាកគំរូត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 2 ។ ដើម្បីរៀបចំដំណោះស្រាយគំរូ ម្សៅឆៅ 300 mg នៃ Brilliant Blue FCF ត្រូវបានរំលាយនៅក្នុងដំណោះស្រាយសតិបណ្ដោះអាសន្ន 1 M NaH2PO4 ហើយរង្គោះរង្គើឱ្យក្លាយទៅជា ដំណោះស្រាយច្បាស់លាស់ទាំងស្រុង។បន្ទាប់មកដំណោះស្រាយគំរូត្រូវបានចាក់ចូលទៅក្នុងជួរឈរ flash ដោយ injector ។ការរៀបចំពិសោធន៍នៃការបន្សុតពន្លឺត្រូវបានរាយក្នុងតារាងទី 1 ។
| ឧបករណ៍ | ម៉ាស៊ីន SepaBean™2 | |||
| ប្រអប់ព្រីន | ប្រអប់ព្រីនធ័រ SepaFlash C18 RP 12 ក្រាម (ស៊ីលីកាស្វ៊ែរ, 20 - 45 μm, 100 Å, លេខបញ្ជាទិញ៖ SW-5222-012-SP) | 12 ក្រាម SepaFlash C18AQ RP ប្រអប់ព្រីនធ័រ (ស៊ីលីកាស្វ៊ែរ, 20 - 45 μm, 100 Å, លេខបញ្ជាទិញ: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| រលក | 254 nm | |||
| ដំណាក់កាលចល័ត | សារធាតុរំលាយ A: ទឹក។ សារធាតុរំលាយ B: មេតាណុល | |||
| អត្រាលំហូរ | 30 មីលីលីត្រ / នាទី។ | |||
| ការផ្ទុកគំរូ | 300 mg (Brilliant Blue FCF ជាមួយនឹងភាពបរិសុទ្ធ 86%) | |||
| ជម្រាល | ពេលវេលា (CV) | សារធាតុរំលាយ B (%) | ពេលវេលា (CV) | សារធាតុរំលាយ B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| ១០.១ | ១០០ | ១០.១ | ១០០ | |
| ១៧.៥ | ១០០ | ១៧.៥ | ១០០ | |
| ១៧.៦ | 10 | ១៧.៦ | 0 | |
| ២២.៦ | 10 | ២២.៦ | 0 | |
លទ្ធផលនិងការពីភាក្សា
ប្រអប់ព្រីនធ័រ SepaFlash C18AQ RP ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការបន្សុត និងការបន្សុតគំរូ។ជម្រាលជំហានត្រូវបានប្រើប្រាស់ដែលក្នុងនោះទឹកសុទ្ធត្រូវបានគេប្រើជាដំណាក់កាលចល័តនៅពេលចាប់ផ្តើមនៃការ elution និងដំណើរការសម្រាប់ 10 ជួរជួរឈរ (CV) ។ដូចដែលបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 3 នៅពេលប្រើទឹកសុទ្ធជាដំណាក់កាលចល័ត គំរូត្រូវបានរក្សាទុកទាំងស្រុងនៅលើប្រអប់ព្រីន។បន្ទាប់មក មេតាណុលក្នុងដំណាក់កាលចល័តត្រូវបានកើនឡើងដោយផ្ទាល់ដល់ 100% ហើយជម្រាលត្រូវបានរក្សាទុកសម្រាប់ 7.5 CV ។គំរូត្រូវបានដកចេញពី 11.5 ទៅ 13.5 CV ។នៅក្នុងប្រភាគដែលប្រមូលបាន ដំណោះស្រាយគំរូត្រូវបានជំនួសពីដំណោះស្រាយសតិបណ្ដោះអាសន្ន NaH2PO4 ទៅជាមេតាណុល។ការប្រៀបធៀបជាមួយនឹងដំណោះស្រាយដែលមានជាតិទឹកខ្ពស់ មេតាណុលមានភាពងាយស្រួលជាងមុនក្នុងការយកចេញដោយការហួត rotary ក្នុងជំហានបន្តបន្ទាប់ ដែលជួយសម្រួលដល់ការស្រាវជ្រាវខាងក្រោម។
រូបភាពទី 3. ពន្លឺ chromatogram នៃគំរូនៅលើ cartridge C18AQ ។
ដើម្បីប្រៀបធៀបឥរិយាបទរក្សាទុកនៃប្រអប់ព្រីន C18AQ និងប្រអប់ព្រីន C18 ធម្មតាសម្រាប់គំរូនៃប៉ូលខ្លាំង ការធ្វើតេស្តប្រៀបធៀបប៉ារ៉ាឡែលត្រូវបានអនុវត្ត។ប្រអប់ព្រីនធ័រ SepaFlash C18 RP ត្រូវបានប្រើប្រាស់ ហើយពន្លឺ chromatogram សម្រាប់គំរូត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 4ដូច្នេះជម្រាលចាប់ផ្តើមត្រូវបានកំណត់នៅ 10% មេតាណុលក្នុងទឹក 90% ។ដូចដែលបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 4 ដោយសារតែការដួលរលំនៃដំណាក់កាល hydrophobic នៃខ្សែសង្វាក់ C18 ដែលបណ្តាលមកពីសមាមាត្រ aqueous ខ្ពស់ គំរូត្រូវបានរក្សាទុកទទេនៅលើ cartridge C18 ធម្មតា ហើយត្រូវបានដកចេញដោយផ្ទាល់ដោយដំណាក់កាលចល័ត។ជាលទ្ធផល ប្រតិបត្តិការនៃការលុបចោលគំរូ ឬការបន្សុតមិនអាចបញ្ចប់បានទេ។
រូបភាពទី 4. ពន្លឺ chromatogram នៃគំរូនៅលើ cartridge C18 ធម្មតា។
ការប្រៀបធៀបជាមួយជម្រាលលីនេអ៊ែរ ការប្រើប្រាស់ជម្រាលជំហានមានគុណសម្បត្តិដូចខាងក្រោមៈ
1. ការប្រើប្រាស់សារធាតុរំលាយ និងពេលវេលាដំណើរការសម្រាប់ការបន្សុតគំរូត្រូវបានកាត់បន្ថយ។
2. ផលិតផលគោលដៅ elutes នៅក្នុងកំពូលដ៏មុតស្រួច ដែលកាត់បន្ថយបរិមាណនៃប្រភាគដែលប្រមូលបាន ហើយដូច្នេះជួយសម្រួលដល់ការហួត rotary ខាងក្រោម ក៏ដូចជាការសន្សំពេលវេលា។
3. ផលិតផលដែលប្រមូលបានគឺនៅក្នុងមេតាណុលដែលងាយនឹងហួត ដូច្នេះពេលវេលាស្ងួតត្រូវបានកាត់បន្ថយ។
សរុបសេចក្តីមក សម្រាប់ការបន្សុតគំរូដែលមានលក្ខណៈប៉ូលខ្លាំង ឬ hydrophilic ខ្លាំងនោះ SepaFlash C18AQ RP flash cartridges រួមបញ្ចូលគ្នាជាមួយប្រព័ន្ធ flash chromatography ដែលត្រៀមរួចជាស្រេច SepaBean™ Machine អាចផ្តល់នូវដំណោះស្រាយលឿន និងមានប្រសិទ្ធភាព។
អំពីប្រអប់ព្រីនធ័រ SepaFlash Bonded Series C18 RP
មានប្រអប់ព្រីនធ័រ SepaFlash C18AQ RP ដែលមានលក្ខណៈពិសេសខុសៗគ្នាពីបច្ចេកវិទ្យា Santai (ដូចបង្ហាញក្នុងតារាងទី 2)។
| លេខទំនិញ | ទំហំជួរឈរ | អត្រាលំហូរ (មីលីលីត្រ/នាទី) | សម្ពាធអតិបរមា (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 ក្រាម។ | ៥-១៥ | ៤០០/២៧.៥ |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 ក្រាម។ | ១០-២៥ | ៤០០/២៧.៥ |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 ក្រាម។ | ១០-២៥ | ៤០០/២៧.៥ |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 ក្រាម។ | ១៥-៣០ | ៤០០/២៧.៥ |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 ក្រាម។ | ២៥-៥០ | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 ក្រាម។ | ៣០-៦០ | ៣០០/២០.៧ |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 ក្រាម។ | ៤០-៨០ | ៣០០/២០.៧ |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 ក្រាម។ | ៤០-៨០ | ២៥០/១៧.២ |
តារាងទី 2. SepaFlash C18AQ RP flash cartridges ។
សមា្ភារៈវេចខ្ចប់៖ ស៊ីលីកាដែលជាប់ស្អិត C18(AQ) ស្វ៊ែរដែលមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់, 20 - 45 μm, 100 Å។
តក្កវិជ្ជា (ដូចបង្ហាញក្នុងតារាងទី ២)។
ពេលវេលាផ្សាយ៖ ថ្ងៃទី ២៧ ខែសីហា ឆ្នាំ ២០១៨