พลังงานบนเครื่องดนตรีและรอให้ "ซิลิกา Readbare จะเริ่มละลายในสารละลายน้ำของ pH 9 แม้ว่าจะช้ามากในตัวทำละลายที่มีค่า pH ต่ำกว่า 9 ซิลิกาเปลือยมีความเสถียรถ้าค่า pH ของตัวทำละลายสูงกว่า 9 ตรวจสอบให้แน่ใจว่าการเชื่อมต่อเครือข่าย iPad นั้นถูกต้องและเราเตอร์เปิดใช้งาน
เพื่อการทำให้บริสุทธิ์ที่ดีที่สุดด้วยคอลัมน์แฟลช C18 โปรดทำตามขั้นตอนเหล่านี้:
①ล้างคอลัมน์ด้วย 100% ของตัวทำละลายที่แข็งแกร่ง (อินทรีย์) สำหรับ 10 - 20 CVS (ปริมาตรคอลัมน์) โดยทั่วไปเมทานอลหรือ acetonitrile
②ล้างคอลัมน์ด้วยน้ำแข็ง 50% + 50% น้ำ (หากจำเป็นต้องใช้สารเติมแต่งให้รวมไว้) สำหรับอีก 3 - 5 CVS
③ล้างคอลัมน์ด้วยเงื่อนไขการไล่ระดับสีเริ่มต้นสำหรับ 3 - 5 CVS
สำหรับขนาดคอลัมน์ระหว่าง 4G และ 330G ตัวเชื่อมต่อ Luer มาตรฐานจะใช้ในคอลัมน์แฟลชเหล่านี้ สำหรับขนาดคอลัมน์ 800G, 1600G และ 3000G ควรใช้อะแดปเตอร์เชื่อมต่อเพิ่มเติมเพื่อติดตั้งคอลัมน์แฟลชขนาดใหญ่เหล่านี้ในระบบโครมาโตกราฟีแฟลช โปรดดูเอกสารอะแดปเตอร์ Santai สำหรับคอลัมน์แฟลช 800 กรัม, 1600 กรัม, 3kg แฟลชสำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม
สำหรับคอลัมน์เฟสปกติขอแนะนำให้ใช้เฟสมือถือที่อัตราส่วนของเมทานอลไม่เกิน 25%
โดยทั่วไปขอแนะนำให้ใช้เฟสมือถือที่อัตราส่วนของตัวทำละลายขั้วโลกไม่เกิน 5% ตัวทำละลายขั้วโลก ได้แก่ DMSO, DMF, THF, ชา ฯลฯ
การโหลดตัวอย่างที่เป็นของแข็งเป็นเทคนิคที่มีประโยชน์ในการโหลดตัวอย่างที่จะทำให้บริสุทธิ์ลงในคอลัมน์โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับตัวอย่างที่มีความสามารถในการละลายต่ำ ในกรณีนี้คาร์ทริดจ์ Ilok Flash เป็นตัวเลือกที่เหมาะสมมาก
โดยทั่วไปตัวอย่างจะถูกละลายในตัวทำละลายที่เหมาะสมและดูดซับลงบนตัวดูดซับที่เป็นของแข็งซึ่งอาจเหมือนกับที่ใช้ในคอลัมน์แฟลชรวมถึงดินไดอะตอมเมียสหรือซิลิกาหรือวัสดุอื่น ๆ หลังจากการกำจัด / การระเหยของตัวทำละลายที่เหลือแล้วตัวดูดซับจะถูกวางไว้บนคอลัมน์ที่เต็มไปด้วยคอลัมน์บางส่วนหรือลงในคาร์ทริดจ์โหลดของแข็งที่ว่างเปล่า สำหรับข้อมูลรายละเอียดเพิ่มเติมโปรดดูเอกสารคู่มือผู้ใช้คาร์ทริดจ์ ILOK-SL สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม
ปริมาณคอลัมน์เท่ากับปริมาณที่ตายแล้ว (VM) เมื่อไม่สนใจปริมาณเพิ่มเติมในท่อที่เชื่อมต่อคอลัมน์ด้วยหัวฉีดและเครื่องตรวจจับ
Time Dead (TM) เป็นเวลาที่จำเป็นสำหรับการชะล้างส่วนประกอบที่ไม่ได้รับการแก้ไข
DEAD VOLUME (VM) เป็นปริมาณของเฟสมือถือที่จำเป็นสำหรับการชะล้างส่วนประกอบที่ไม่ได้รับการแก้ไข ปริมาณที่ตายได้สามารถคำนวณได้โดยสมการต่อไปนี้: VM = F0*TM
ในบรรดาสมการข้างต้น F0 คืออัตราการไหลของเฟสมือถือ
ไม่ซิลิกาที่ปกคลุมด้วยปลายนั้นไม่ละลายในตัวทำละลายอินทรีย์ที่ใช้กันทั่วไป
คอลัมน์ซิลิกาแฟลชนั้นใช้แล้วทิ้งและใช้งานเดี่ยว แต่ด้วยการจัดการที่เหมาะสมตลับซิลิกาสามารถนำกลับมาใช้ใหม่ได้โดยไม่ต้องเสียสละประสิทธิภาพในการนำกลับมาใช้ใหม่คอลัมน์ซิลิกาแฟลชจะต้องแห้งโดยอากาศบีบอัด
ที่เก็บข้อมูลที่เหมาะสมจะอนุญาตให้นำคอลัมน์แฟลช C18 มาใช้ใหม่:
•อย่าปล่อยให้คอลัมน์แห้งหลังจากใช้
•ลบตัวดัดแปลงอินทรีย์ทั้งหมดโดยล้างคอลัมน์ด้วยเมทานอล 80% หรือ acetonitrile ในน้ำสำหรับ 3 - 5 CVS
•จัดเก็บคอลัมน์ในตัวทำละลายที่ดังกล่าวข้างต้นโดยมีอุปกรณ์สิ้นสุด
สำหรับคอลัมน์ขนาดใหญ่ที่สูงกว่า 220 กรัมเอฟเฟกต์ความร้อนจะเห็นได้ชัดในกระบวนการของสมดุลก่อน ขอแนะนำให้ตั้งค่าอัตราการไหลที่ 50-60% ของอัตราการไหลที่แนะนำในกระบวนการ pre-Equilibrium เพื่อหลีกเลี่ยงผลกระทบความร้อนที่ชัดเจน
ผลทางความร้อนของตัวทำละลายผสมนั้นชัดเจนกว่าตัวทำละลายเดี่ยว ใช้ระบบตัวทำละลาย cyclohexane/ethyl acetate เป็นตัวอย่างแนะนำว่าใช้ cyclohexane 100% ในกระบวนการ pre-Equilibrium เมื่อเสร็จสิ้นการตรวจสอบล่วงหน้าการทดลองแยกสามารถทำได้ตามระบบตัวทำละลายที่ตั้งไว้ล่วงหน้า
สำหรับ sepaflashTMคอลัมน์ซีรีส์มาตรฐานตัวเชื่อมต่อที่ใช้คือ Luer-Lock ในและ Luer-Slip Out คอลัมน์เหล่านี้สามารถติดตั้งโดยตรงบนระบบ Combiflash ของ ISCO
สำหรับซีรี่ส์ Sepaflash HP ซีรีส์ที่ถูกผูกมัดหรือคอลัมน์ ILOKTM ซีรีส์ตัวเชื่อมต่อที่ใช้คือ Luer-Lock ในและ Luer-Lock ออก คอลัมน์เหล่านี้สามารถติดตั้งบนระบบ Combiflash ของ ISCO ผ่านอะแดปเตอร์พิเศษ สำหรับรายละเอียดของอะแดปเตอร์เหล่านี้โปรดดูเอกสาร Adapter Santai Adapter สำหรับ 800g, 1600g, คอลัมน์แฟลช 3 กิโลกรัม
ปริมาตรคอลัมน์พารามิเตอร์ (CV) มีประโยชน์อย่างยิ่งในการกำหนดปัจจัยขนาด นักเคมีบางคนคิดว่าปริมาตรภายในของคาร์ทริดจ์ (หรือคอลัมน์) โดยไม่มีวัสดุบรรจุภายในคือปริมาณคอลัมน์ อย่างไรก็ตามปริมาตรของคอลัมน์ที่ว่างเปล่าไม่ใช่ CV CV ของคอลัมน์หรือคาร์ทริดจ์ใด ๆ คือปริมาตรของพื้นที่ที่ไม่ได้ถูกครอบครองโดยวัสดุที่บรรจุไว้ล่วงหน้าในคอลัมน์ ปริมาตรนี้รวมถึงปริมาตรคั่นระหว่างหน้า (ปริมาตรของพื้นที่นอกอนุภาคที่บรรจุ) และความพรุนภายในของอนุภาค (ปริมาตรรูขุมขน)
คอลัมน์อลูมินาแฟลชเป็นตัวเลือกทางเลือกเมื่อตัวอย่างมีความอ่อนไหวและมีแนวโน้มที่จะย่อยสลายในซิลิกาเจล
ความดันด้านหลังของคอลัมน์แฟลชเกี่ยวข้องกับขนาดอนุภาคของวัสดุที่บรรจุ วัสดุที่บรรจุที่มีขนาดอนุภาคขนาดเล็กจะส่งผลให้แรงดันหลังสูงขึ้นสำหรับคอลัมน์แฟลช ดังนั้นอัตราการไหลของเฟสมือถือที่ใช้ในแฟลชโครมาโตกราฟีควรลดลงตามลำดับเพื่อป้องกันไม่ให้ระบบแฟลชหยุดทำงาน
ความดันด้านหลังของคอลัมน์แฟลชนั้นเป็นสัดส่วนกับความยาวของคอลัมน์ ร่างกายคอลัมน์ที่ยาวขึ้นจะส่งผลให้แรงดันย้อนกลับสูงขึ้นสำหรับคอลัมน์แฟลช นอกจากนี้ความดันด้านหลังของคอลัมน์แฟลชนั้นเป็นสัดส่วนผกผันกับ ID (เส้นผ่านศูนย์กลางภายใน) ของคอลัมน์ ในที่สุดความดันด้านหลังของคอลัมน์แฟลชนั้นเป็นสัดส่วนกับความหนืดของเฟสมือถือที่ใช้ในแฟลชโครมาโตกราฟี