Strøm på instrumentet og vent på dets hurtige "læsebare silica vil begynde at opløses i vandig opløsning af pH 9, omend meget langsomt. I opløsningsmidlet med pH lavere end 9 er den nakne silica stabil. Hvis pH-værdien for opløsningsmidlet overstiger 9, vil opløsningen fremskynde, da pH-stigningen for funktionaliserede silica, er den arbejdspladse rækkevidde af opløsningsmidlet. Sørg for, at iPad -netværksforbindelsen er korrekt, og routeren er tændt.
For optimal oprensning med C18 -flash -kolonner, følg disse trin:
① Skyl søjlen med 100% af det stærke (organiske) opløsningsmiddel for 10 - 20 CVS (søjlevolumen), typisk methanol eller acetonitril.
② Skyl søjlen med 50% stærk + 50% vandig (hvis tilsætningsstoffer er påkrævet, inkluder dem) til yderligere 3 - 5 CVS.
③ Skyl søjlen med de indledende gradientbetingelser for 3 - 5 CVS.
Til søjlestørrelse mellem 4G og 330G bruges standard Luer -stik i disse flash -kolonner. For søjlestørrelse på 800 g, 1600 g og 3000 g, skal yderligere forbindelsesadaptere bruges til at montere disse store flash -søjler på flashchromatografisystemet. Se dokumentet Santai Adapter Kit til 800 g, 1600 g, 3 kg flash -kolonner for flere detaljer.
For normal fasesøjle anbefales det at bruge den mobile fase, hvor forholdet mellem methanol ikke overstiger 25%.
Generelt anbefales det at bruge den mobile fase, hvor forholdet mellem de polære opløsningsmidler ikke overstiger 5%. De polære opløsningsmidler inkluderer DMSO, DMF, THF, te osv.
Lastning af fast prøve er en nyttig teknik til at indlæse prøven, der skal renses på en søjle, især for prøver af lav opløselighed. I dette tilfælde er Ilok Flash -patron et meget passende valg.
Generelt opløses prøven i et passende opløsningsmiddel og adsorberes på et fast adsorbant, som kan være det samme som brugt i flash -søjler, herunder diatomé jord eller silica eller andre materialer. Efter fjernelse / fordampning af det resterende opløsningsmiddel sættes adsorbenten på toppen af en delvis fyldt søjle eller i en tom fast belastningspatron. For mere detaljerede oplysninger henvises til dokumentet ILOK-SL-patron Brugervejledning for flere detaljer.
Kolonvolumen er omtrent lig med dødvolumen (VM), når du ignorerer den ekstra lydstyrke i rørene, der forbinder søjlen med injektoren og detektoren.
Dead Time (TM) er den tid, der kræves til eluering af en ikke -afholdt komponent.
Dead Volume (VM) er volumenet af den mobile fase, der kræves til eluering af en urettet komponent. Dead Volume kan beregnes ved følgende ligning: VM = F0*TM.
Blandt ovenstående ligning er F0 strømningshastigheden for den mobile fase.
Nej, slutkappet silica er uopløselig i ethvert almindeligt anvendt organisk opløsningsmiddel.
Silica -flash -søjlerne kan engangs og til engangsbrug, men med korrekt håndtering kan silica -patronerne genanvendes uden at ofre ydelsen. I orden for at blive genanvendt skal silica -flash -søjlen simpelthen tørres af trykluft eller skylles med og opbevares i isopropanol.
Korrekt opbevaring tillader, at C18 -flash -kolonner genbruges:
• Lad aldrig kolonnen tørre ud efter brug.
• Fjern alle organiske modifikatorer ved at skylle søjlen med 80% methanol eller acetonitril i vand i 3 - 5 CVS.
• Opbevar kolonnen i det ovennævnte skylning af opløsningsmiddel med slutbeslag på plads.
For de store størrelse kolonner over 220 g er den termiske virkning åbenlyst i processen med pre-ligevægt. Det anbefales at indstille strømningshastigheden til 50-60% af den foreslåede strømningshastighed i præ-ligevægtsprocessen for at undgå åbenlyst termisk virkning.
Den termiske virkning af blandet opløsningsmiddel er mere åbenlyst end enkelt opløsningsmiddel. Tag opløsningsmiddelsystemet cyclohexan/ethylacetat som et eksempel, det foreslås, at brug 100% cyclohexan i præ-ligevægtsprocessen. Når præ-ligevægt er afsluttet, kunne separationseksperimentet udføres i henhold til det forudindstillede opløsningsmiddelsystem.
For SepaflashTMStandardseriekolonner, de anvendte stik er Luer-Lock In og Luer-slip ud. Disse kolonner kunne være direkte monteret på ISCOs Combiflash -systemer.
For Sepaflash HP-serien, Bonded Series eller ILOKTM Series-søjler, er de anvendte forbindelser Luer-Lock In og Luer-Lock Out. Disse kolonner kunne også monteres på ISCOs Combiflash -systemer via ekstra adaptere. For detaljerne i disse adaptere henvises til dokumentet Santai Adapter Kit for 800 g, 1600 g, 3 kg flash -kolonner.
Parameterkolonnevolumen (CV) er især nyttig til at bestemme opskaleringsfaktorer. Nogle kemikere mener, at den interne volumen af patronen (eller søjlen) uden pakningsmateriale inde er kolonnemolumen. Imidlertid er volumenet af en tom søjle ikke CV. CV'en i en hvilken som helst søjle eller patron er volumenet på det rum, der ikke er besat af det materiale, der er pakket i en kolonne. Dette volumen inkluderer både det interstitielle volumen (volumen af rummet uden for de pakket partikler) og partikelens egen interne porøsitet (porevolumen).
Aluminiumoxid -flash -søjlerne er en alternativ mulighed, når prøverne er følsomme og tilbøjelige til nedbrydning på silicagel.
Bagtrykket i flashkolonnen er relateret til partikelstørrelsen af pakket materiale. Det pakket materiale med mindre partikelstørrelse vil resultere i højere rygtryk for flashkolonnen. Derfor bør strømningshastigheden for den mobile fase, der anvendes i flashchromatografi, sænkes i overensstemmelse hermed for at forhindre, at flash -systemet stopper med at arbejde.
Bagtrykket i flashkolonnen er også proportionalt med søjlens længde. Længere søjlelegeme vil resultere i højere rygtryk for flashkolonnen. Endvidere er bagtrykket af flashkolonne omvendt proportionalt med ID (indre diameter) af søjlelegemet. Endelig er bagtrykket af flashkolonne proportionalt med viskositeten af den mobile fase, der er anvendt i flashchromatografi.